ICS 65.020.20 B61 江 DB32 苏 省 地 方 标 准 DB 32/T 3306—2017 蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程 Technique rules for the Virus-free plantlet production of Blueberry 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 文稿版次选择 2017 - 09 - 25 发布 江苏省质量技术监督局 2017 - 10 - 25 实施 发 布 DB32/T 3306—2017 前  言 本标准按照GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构及编写》给出的规则编写。 本标准由江苏农林职业技术学院提出。 本标准由江苏农林职业技术学院起草。 本标准主要起草人：王永平、宗树斌、刘玉华、许建民、王珊、任焕焕。 I DB32/T 3306—2017 蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程 1 范围 本标准规定了蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程的脱毒、外植体消毒、初代培养、病毒检测、继代培 养、壮苗培养、驯化生根、上钵、苗期管理、生产记录等。 本标准适用于全省蓝莓组培脱毒种苗的生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4285 农药安全使用标准 GB/T 8321(所有部分) 农药合理使用准则 3 脱毒 3.1 母株 选择具有品种典型特征特性、生长势强、目测无病症的优良单株。 3.2 热处理钝化病毒 取母株的侧枝嫩梢，放入病毒钝化处理器，60℃热击10s。 4 外植体消毒 将经热处理的嫩梢剪取放入烧杯，纱布封口，自来水冲洗30min～60min，用75%乙醇浸润130s后， 用无菌水洗净，再放入5%～10%的NaClO溶液中浸泡10min～15min后，用无菌水冲洗5次，再用无菌滤纸 吸去表面水分，置于无菌培养皿中备用。 5 初代培养 5.1 初代培养基 WPM+IBA 0.05mg/L+ZT 0.5mg/L，pH 5.0。 5.2 接种 在超净工作台上，用已灭菌的剪刀、镊子将消过毒的外植体均匀分成1.5cm～2.0cm的小段，每段含 1芽～2芽，接种于初代培养基中，每瓶5株～10株。注明品种、编号和接种日期。 5.3 培养条件 1 DB32/T 3306—2017 温度25℃±2℃、光照强度2000lx～3000lx、光照时间16h/d，培养100d～120d。 6 病毒检测 抽取初代培养的蓝莓无菌苗进行蓝莓枯焦病毒( BLScV)、蓝莓急性坏死病毒(BLShV )、蓝莓鞋带病 毒(BSSV)、蓝莓红环斑病毒(BRRV)、蓝莓坏死环斑病烟草环斑病毒(TRSV)、蓝莓叶片斑点病毒(BLMV) 的病毒检测。检测方法采用PCR/RT-PCR。无病毒苗作为核心种苗继代扩繁培养。 7 继代培养 7.1 继代培养基 WPM+NAA 0.5mg/L+ZT 1mg/L，pH 5.0。 7.2 培养条件 温度为25℃±2℃，光照强度1000lx～3000lx，光照时间12h/d～16h/d。60d～90d培养一代，培养 不超过15代。 8 壮苗培养 8.1 壮苗培养基 WPM+IBA 0.1mg/L，pH 5.0～5.5。 8.2 培养条件 温度为25℃±2℃，光照强度2000lx～3000lx，光照时间14h/d～16h/d。培养90d～120d。 9 驯化生根 9.1 生根设施 在苗床上搭建高度50cm的小拱棚，安装喷灌设备，苗床上面铺一层无纺布，拱棚上面覆盖塑料薄膜， 上盖遮阳网。 9.2 基质 选用苔藓作为专用基质，浸泡12h甩干，湿度控制在40%～60%，塞进5×10的穴盘内。 9.3 炼苗 将培养瓶放入温室内，上盖一层遮阳网，封口炼苗7d,然后打开遮阳网，把瓶盖拧松，再炼苗7d。 9.4 扦插 选择生长健壮、长度5cm以上、木质化程度好的组培苗进行扦插，先用清水清洗掉培养基，剪去根 部膨大部分，去掉下部三分之一的叶片，在萘乙酸(NAA)1000mg/L的生根液中浸蘸1min，然后用镊子捏 住插穗基部，插入塞好苔藓的穴盘内压紧。每穴1株，插入的深度为2cm～3cm。 2 DB32/T 3306—2017 9.5 插后管理 插后立即喷水1次。15d内每天叶面喷水2次～3次，相对湿度控制在80%～100%，15d后开始生根并长 出新叶，每天喷水1次，湿度控制在70%左右，30d后去掉拱棚上的遮阳网和塑料薄膜，湿度控制在60% 左右。温度控制在20℃～30℃。 10 上钵 10.1 栽培容器 选用13×12黑色软质营养钵为宜。 10.2 栽培基质 3 壤土、草碳土、腐锯末按3:1:1的体积比例混合，加入硫磺粉均匀混拌。1m 基质使用硫磺粉0.75kg～ 1kg将基质pH值调至4.5～5.5。 10.3 上钵时间 须根长至3cm，苗高超过10cm时进行上钵移植。 10.4 上钵移植 先装填基质至营养钵的1/3处，然后把苗从穴盘内取出放到营养钵的中央扶正，再把四周填满基质， 稍用力压紧，使基质低于营养钵上沿2CM～3cm。每钵一株，浇透水。 11 苗期管理 11.1 温湿度管理 白天温度25℃～30℃，夜间不低于13℃，基质温度不低于15℃，基质含水量在50%～60%。 11.2 水肥管理 缓苗期保持基质湿润；速生期应量多次少，见干见湿；生长后期要控制浇水。速生期以氮肥为主， 磷、钾肥为辅；生长后期停止使用氮肥，适当增加磷、钾肥。追肥结合浇水进行，浓度控制在0.1%～0.2%。 速生期每月施3次。 11.3 病虫害防治 贯彻预防为主，综合防治的方针，选用生物农药、高效、低毒、低残留的化学农药，交替用药，改 进施药技术，降低农药用量，化学农药按GB 4285、GB 8321的规定执行。 11.4 其他管理 育苗期发现容器内基质下沉，及时填满，经常挪动容器进行重新排列并截断伸出容器外的根系。 12 生产记录 做好全程记录，并将记录保持2年。 3 DB32/T 3306—2017 _________________________________ 4