ICS 65.020.01 B61 DB63 青 海 省 地 方 标 准 DB 63/T 1716—2018 黑果枸杞组织培养育苗技术规范 2018 - 12 - 26 发布 青海省市场监督管理局 2019 - 03 - 20 实施 发 布 DB63/T 1716—2018 前 言 本规范按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本规范由中国科学院西北高原生物研究所提出并归口。 本规范起草单位:中国科学院西北高原生物研究所。 本标准起草人：王莉、李毅、胡延平、王溪、王均、王建科、石琳、杨文韬。 I DB63/T 1716—2018 黑果枸杞组织培养育苗技术规范 1 范围 本标准规定了黑果枸杞（Lycium ruthenicum Murr）组织培养快繁育苗中的一般要求、前期准备、 描述了外植体处理、不同阶段培养的方法，给出了预培养、诱导培养、增殖培养和生根培养的技术内容。 本标准适用于黑果枸杞优良单株或株系的快速育苗。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 DB63/T 1714 宁夏枸杞组织培养育苗技术规范 3 一般要求 对于试剂使用及溶液配制过程的要求,按照DB63/T 1714第4章的规定执行。 4 前期准备 组织培养的前期准备，按照DB63/T 1714第5章的规定执行；其中各种培养基的配方如下： ——预培养基：MS 基础培养基+6-BA0.20 mg/L +2,4-D2.00 mg/L+ CH300.00 mg/L+Vc2.00 mg/L+ 蔗糖 3%+琼脂粉； ——诱导培养基：MS 基础培养基+6-BA3.00 mg/L+NAA0.10 mg/L + CH300.00 mg/L+Vc2.00 mg/L+ 蔗糖 3%+琼脂粉； ——增殖培养基：MS 基础培养基+6-BA1.00 mg/L+NAA0.05 mg/L + CH300.00 mg/L+Vc2.00 mg/L+ 蔗糖 3%+琼脂粉； 生根培养基MS基础培养基 + CH300.00 mg/L ++Vc2.00 mg/L蔗糖3%+琼脂粉。 5 外植体的处理方法 5.1 母株选择 选择株型好、果实大、无刺或少刺、果实着生均匀、单株产量高、耐旱性强、生长速度快等性状的 植株作为母株。 5.2 外植体的处理方法 5.2.1 外植体的获取 每年6月～7月剪取母株上无病虫危害、无病毒侵染、生长健壮的当年生嫩枝条。 1 DB63/T 1716—2018 5.2.2 外植体消毒 将嫩枝用流水冲洗干净后，将保留叶柄的叶片剪下，在超净工作台上用70.00%的酒精漂洗叶片30 s， 再转入0.10%的升汞中消毒6 min～8 min，用无菌水冲洗5次～8次。 6 培养方法与程序 6.1 外植体预培养 将无菌叶片接种于预培养基上，叶片平放于培养基表面。在温度22 ℃～25 ℃，光照强度2000 Lux～3000 Lux、光照时间12 h/d～14 h/d的条件下培养2周。 6.2 不定苗诱导培养 将组织膨大、表面蓬松、切口处出现淡黄色愈伤组织的外植体转接至诱导培养基中，在温度22 ℃～ 25 ℃、光照强度3000 Lux～5000 Lux、光照时间14 h/d～16 h/d的条件下培养4周～6周，形成不定苗。 6.3 不定苗增殖培养 6.3.1 微扦插增殖培养 株高大于3 cm的不定苗，剪切成带有2片～4片叶的茎段，转接于增殖培养基中。每2周按照此方法 进行转接或进行生根培养。 6.3.2 增殖分化培养 将生长至1 cm～2 cm的不定苗从基部进行单株分离，转接于增殖培养基中培养4周～6周，形成丛生 苗。重新转接至增殖培养基或进行生根培养。 6.3.3 培养条件 在温度为22 ℃～25 ℃、光照强度5000 Lux～10000 Lux、光照时间14 h/d～16 h/d的条件下培养。 6.4 生根培养 按照DB63/T 1714第7.5条的规定，将增殖培养中获得的茎段或丛生苗进行生根培养。 _________________________________ 2