ICS 65.020 B 61 DB45 广 西 壮 族 自 治 区 地 方 标 准 DB 45/T 1783—2018 石斛兰组培快繁技术规程 Technical regulation for culture of Dendrobium 2018 - 06 - 01 发布 广西壮族自治区质量技术监督局 2018 - 07 - 01 实施 发 布 — DB45/T 1783 2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由广西壮族自治区林业厅提出。 本标准起草单位：广西壮族自治区林业科学研究院。 本标准主要起草人：龚建英、王华新、龙定建、唐庆、陈宝玲、陈尔、唐遒冥、吴玉华、杨舒婷、 李进华、林茂、孙利娜、苏莉花。 I — DB45/T 1783 2018 石斛兰组培快繁技术规程 1 范围 本标准规定了石斛兰（Dendrobium sw）组培快繁的术语和定义、外植体的选取和处理、诱导培养、 增殖培养、分化培养、生根培养、瓶苗炼苗、瓶苗移栽、穴盘苗管理、种苗出圃、档案管理等技术和管 理要求。 本标准适应于广西境内石斛兰组培苗生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则 NY/T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 优株 superior plant 观赏性、抗逆性、繁殖力等综合性状显著优于其它植株的单株。 3.2 拟原球茎 protocorm-like body 兰科植物在组培过程中诱导形成的类似于原球茎的球状物。 4 外植体的选取和处理 4.1 选取 选择优株的叶芽或花芽作为外植体。 4.2 处理 4.2.1 采集前处理 用50％多菌灵可湿性粉剂500～1 000倍药液喷洒待采植株，每天一次，连续喷一周。 1 — DB45/T 1783 2018 4.2.2 采集 用剪刀从最基部剪切叶芽或花芽，除去叶片和花蕾，保留长度4 cm～5 cm。 4.2.3 表面清洗 除。 自来水连续冲洗15 min～20 min，用75％酒精擦洗外植体表面，将叶鞘和紧贴假鳞茎的黄褐色膜剥 4.2.4 外植体消毒 在超净工作台上，用75％酒精浸泡外植体15 s～30 s，无菌水冲洗3～5遍后，置于0.1％氯化汞溶液 中浸泡1.5 min～3 min，用无菌水冲洗4～6遍，用消毒过的滤纸吸干水，备用。 5 诱导培养 5.1 诱导培养基 见附录A.1。 5.2 外植体接种 将消毒后的叶芽或花芽外植体两端组织剪除，保留带芽茎段2 cm～3 cm，或挑取茎尖0.5 mm～2.0 mm 直插或平放于培养基上。 5.3 培养周期 培养30 d～45 d，形成单芽、丛芽或拟原球茎。 5.4 培养条件 培养室的温度宜为24 ℃±1 ℃，光照强度2 000 Lx～3 000 Lx，光照时间每天10 h～12 h。 6 增殖培养 6.1 增殖培养基 见附录A.2。 6.2 增殖转接 将诱导培养形成的单芽、丛芽或拟原球茎转接到增殖培养基上。 6.3 接种数量 用250 mL培养瓶每瓶接种6:00～8:00，丛芽每个点以3～5个小芽为宜，拟原球茎以每个点直径0.5 cm 为宜。 6.4 增殖周期 培养45 d～60 d，增殖倍数3～8倍。 2 — DB45/T 1783 2018 6.5 培养条件 同5.4。 7 分化培养 7.1 分化培养基 见附录A.3。 7.2 分化转接 拟 转接到分化培养基上。 将增殖培养形成的 原球茎 7.3 接种数量 同6.3。 7.4 培养周期 d d 拟 丛 培养45 ～60 ， 原球茎分化形成 芽。 7.5 培养条件 同5.4。 8 生根培养 8.1 生根培养基 见附录A.4。 8.2 生根转接 获得的单芽或丛生芽转接到生根培养基上。 将增殖培养、分化培养 8.3 接种数量 L 接 用800 m 培养瓶每瓶 种25株。 8.4 培养周期 d d 高 培养45 ～60 ，根长4 cm～6 cm，株 5 cm～7 cm。 8.5 培养条件 同5.4。 9 瓶苗炼苗 9.1 炼苗时间 春夏季7 d～10 d，秋冬季15 d～20 d。 3 — DB45/T 1783 2018 9.2 炼苗条件 光照强度3 000 Lx～6 000 Lx，温度20 ℃～30 ℃，避免强光和高温灼伤芽苗。 9.3 污染苗处理 炼苗过程中的污染苗废弃。 9.4 出瓶要求 苗高5 cm～7 cm，茎粗≥0.4 cm，根数≥5条，根长≥4 cm。茎叶无变异，叶色正常，无污染。 10 瓶苗移栽 10.1 移栽时间 4～5月或9～10月。 10.2 瓶苗清洗 清水将瓶苗根部培养基洗净后，用80％多菌灵可湿性粉剂1 000倍液浸泡植株10 min～15 min，将小 苗捞出，沥干水分，直至根部发白即可移栽。 10.3 移栽基质 选取水苔为基质，移栽前用80％多菌灵可湿性粉剂800倍液消毒，沥干水备用。 10.4 移栽容器 用32孔或50孔穴盘，长宽规格54 cm×28 cm，孔径5 cm～7 cm，高度5 cm～6 cm。 10.5 移栽方法 每丛3～5株，用水苔包裹根部，置于穴盘孔中，轻压根部。 11 穴盘苗管理 11.1 温度 20 ℃～30 ℃。 11.2 湿度 相对湿度70％～80％。 11.3 光照 保持50％～75％遮光度，防止强光直射。 11.4 施肥 小苗长出新芽后，每隔7 d～10 d叶面喷施水溶性复合肥（N:P:K比例30:10:10或20:20:20）1次，浓 度为0.05％～0.1％,连续施肥10次。 4 — DB45/T 1783 2018 11.5 浇水 移栽 2 周后浇透水，一个月后视天气情况浇水，干燥天气 2 d～3 d 浇水 1 次，阴天 5 d～7 d 浇水 1 次，雨天不浇水。 11.6 病虫害防治 11.6.1 主要病虫害 主要病害有软腐病、炭疽病、煤烟病等。主要虫害有蚜虫、蜗牛、地老虎、介壳虫、红蜘蛛等。 11.6.2 防治方法 移栽3 d后，用75％甲基托布津可湿性粉剂800倍液喷淋叶面1次。长出新芽后，根据病虫害情况针 对性防治。农药防治应符合GB/T 8321（所有部分）规定,主要病虫害农药防治方法见附录B。 12 种苗出圃 12.1 质量要求 苗高6 cm～8 cm，茎粗≥0.4 cm，根数≥5条，生长健壮、无病虫害的种苗。 12.2 包装运输 种苗出圃前2 d停止浇水，将小苗从托盘中取出，置于纸箱中，分层排放，每层用纸分开并用胶带 固定。纸箱以胶带密封，宜在阴天运输，路途时间不宜超过5 d。 13 档案管理 建立石斛兰组培育苗技术档案，参照NY/T 2306的规定执行。 5 — DB45/T 1783 2018 AA 附 录 A （资料性附录） 培养基配方 A.1 诱导培养基配方 1/2MS＋白糖25 g/L＋琼脂4.7 g/L＋蛋白 胨1 g/L＋椰汁100 mL/L＋6-BA2.0 mg/L～4.0 mg/L＋ NAA0.05 mg/L～0.5 mg/L，pH 5.4～5.6。 A.2 增殖培养基配方 MS ＋ 白 糖 30 g/L ＋ 琼 脂 4.7 g/L ＋ 活 性 炭 0.5 g/L ＋ 蛋 白 胨 1 g/L ＋ 6-BA0.05 mg/L ～ 3.0 mg/L ＋ NAA0.05 mg/L～2.0 mg/L＋KT 0.05 mg/L～0.5 mg/L，pH 5.4～5.6。 A.3 分化培养基配方 MS ＋ 白 糖 30 g/L ＋ 琼 脂 4.7 g/L ＋ 活 性 炭 0.5 g/L ＋ 蛋 白 胨 1 g/L ＋ 6-BA0.05 mg/L ～ 0.5 mg/L ＋ NAA0.05 mg/L～0.5 mg/L，pH 5.4～5.6。 A.4 生根培养基配方 1/2MS＋白糖30 g/L＋琼脂5.0 g/L＋活性炭1.0 g/L＋蛋白胨2 g/L＋香蕉汁40 g/L＋马铃薯20 g/L ＋6-BA0.05 mg/L～0.5 mg/L＋NAA 0.05 mg/L～0.5 mg/L，pH 5.4～5.6。 6 — DB45/T 1783 2018 BB 附 录 B （资料性附录） 主要病虫害农药防治方法 表B.1给出了主要病虫害农药防治方法。 表B.1 主要病虫害农药防治方法 病虫害种类 防治方法 软腐病 用50％氯溴异氰尿酸可溶粉剂800～1 000倍液，或2％春雷霉素可湿性粉剂300～600倍液喷施。 炭疽病 用450 g/L咪鲜胺水乳剂1 000～2 000倍液，或75％百菌清可湿性粉剂600～800倍液喷施。 煤烟病 及时防治蚜虫、介壳虫。在煤烟病发病初期，用75％百菌清可湿性粉剂600～800倍液喷施。同时改 善通风条件。 蚜虫 用10％吡虫啉可湿性粉剂2 000～4 000倍液，或25 g/L溴氰菊酯乳油1 250～2 500倍液喷施。 蜗牛 每667 m2用6％四聚乙醛颗粒剂400 g～600 g撒施。也可在栽培场地和周围撒生石灰。 地老虎 用5％氯氟氰菊酯乳油5 000～6 666倍液喷施，或每667 m2用3％辛硫磷颗粒6 000 g～8 000 g沟施。 介壳虫 用25％噻嗪酮可湿性粉剂1 000～1 500倍液，或200 g/L双甲脒乳油1 000～1 500倍液喷施。 红蜘蛛 用73％炔螨特乳油2 000～3 000倍液，或15％哒螨灵乳油2 250～3 000倍液喷施。 _________________ 7 中华人民共和国广西地方标准 石斛兰组培快繁技术规程 DB45/T 1783―2018 广西壮族自治区质量技术监督局统一印刷 版权专有 侵权必究