ICS 65.020.20 B 61 广 DB44 东 省 地 方 标 准 DB44/T 2233—2020 黄花倒水莲组培育苗技术规程 Technical speciflcation on tissue culture seedling of Polygala fallax 2020 - 05 - 27 发布 广东省市场监督管理局 2020 - 08 - 27 实施 发 布 DB44/T 2233—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由广东省林业局提出并归口。 本标准起草单位：梅州市林业科学研究所。 本标准主要起草人：蔡梅玲、饶卫芳、肖腊兴、唐国涛、范秀琼、朱昔娇、黄锦荣、王志龙。 I DB44/T 2233—2020 黄花倒水莲组培育苗技术规程 1 范围 本标准规定了黄花倒水莲(Polygala fallax Hemsl) 组培育苗的外植体、瓶苗培养、瓶苗移植、苗 木出圃和建档等技术要求。 本标准适用于黄花倒水莲组培苗的生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版 本适用本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 8321(所有部分) 农药合理使用准则 LY/T 1770 桉树无性系组培快繁技术规程 3 3.1 外植体 外植体采集 在母本园内采集健壮无病虫害嫰枝条作为外植体材料，宜3月～5月连续天晴3 d以上进行。 3.2 预处理 先用滴有少许洗洁精的自来水进行表面清洗，再用自来水冲洗至没泡沫后，剪取6 cm～8 cm带多个 腋芽的茎段，再用纯净水清洗4次～6次，放置超净工作台备用。 3.3 消毒 在无菌环境下，用75%乙醇浸泡10 s后，无菌水清洗1次～2次，再用1‰HgCl2浸泡8 min～12 min后， 用无菌水清洗4次～5次，最后用无菌滤纸吸干表面水分。 4 4.1 瓶苗培养 培养温度 培养适宜温度为25 ℃±2 ℃。 4.2 初代培养 将消毒好的茎段在无菌环境下切成1.0 cm～1.5 cm长的带1个～2个嫰芽的茎段，接种在初代培养基 （配方见附录A）中。1个月左右可诱导出芽。 4.3 增殖培养 在无菌环境下将初代培养诱导的幼芽或丛芽分割成每丛3个～4个芽的小丛，转接增殖培养基（配方 见附录A）中，每瓶3丛，继代周期为25 d～30 d。继代培养不超过30代。 1 DB44/T 2233—2020 4.4 生根培养 从继代培养的幼芽中，挑选叶片展开、叶面光亮、生长健壮的单个分化芽切下，转入生根培养基（配 方见附录A）中进行生根培养，每瓶接种10株，2000 lux～3000 lux光照条件下培养。 4.5 炼苗 当根长至2 cm～3 cm时，将生根瓶苗移至透光20%～30%，温度30 ℃以下的大棚内炼苗10 d～15 d， 再进行开盖炼苗2 d～3 d。 5 瓶苗移植 5.1 容器与基质 采用7 cm×9 cm无纺布营养袋作为种植容器，采用黄心土和泥炭土按体积比（8:2）作基质，定植 前1 d用0.5 g/L的50%多菌灵溶液淋透消毒。 5.2 移植 5.2.1 选取芽苗 将经过炼苗的瓶苗慢慢放入清水中，轻轻摇晃，把培养基清洗干净，整个过程要注意保护好幼苗的 根茎叶不受到损伤。选取根系完整、叶片舒展、根茎结合处无愈伤组织的苗为合格的芽苗，进行上袋移 植培育。其余次品苗移栽至统一苗床,进行集中管理。 5.2.2 移苗 将芽苗定植于营养袋中央，轻压根部，随即浇透定根水，整个过程操作避免损伤枝叶根系。 5.3 苗期管理 5.3.1 遮阴 选用遮光率为70％的遮阴网进行拱棚遮阴10 d～15 d。 5.3.2 水份管理 用清水喷雾。气温高、大风干燥时多浇，气温低、阴天时少浇、雨天不浇，休眠期少浇。禁施任何 肥料。 5.3.3 主要病虫害防治 要保持移苗场所清洁，防止叶斑病、根腐病等滋生。具体按GB/T 8321执行。 6 苗木出圃 苗高30 cm以上，地径0.3 cm以上，生长健壮，无机械损伤，无病虫害的苗木可出圃。 7 建档 按LY/T 1770执行。 2 DB44/T 2233—2020 附 录 A （资料性附录） 黄花倒水莲组织培养基配方 黄花倒水莲组织培养基配方见表A.1。 表 A.1 组织培养基配方表 药品类别 大量元素 微量元素 药品名称 初代培养 增殖培养 -1 生根培养 -1 -1 培养基(mg•L ) 培养基(mg•L ) 培养基(mg•L ) KNO3 1900 1900 950 NH4NO3 1650 1650 825 KH2PO4 170 170 85 MgSO4·7H2O 370 370 185 CaCl2·2H2O 440 440 220 KI 0.83 0.83 0.83 H3BO3 6.2 6.2 6.2 MnSO4·4H2O 22.3 22.3 22.3 ZnSO4·7 H2O 8.6 8.6 8.6 Na2MoO4·2 H2O 0.25 0.25 0.25 CuSO4·5 H2O 0.025 0.025 0.025 CoCl2·6H2O 0.025 0.025 0.025 Na2·EDTA 37.3 37.3 37.3 FeSO4·7H2O 27.8 27.8 27.8 肌醇 100 100 100 甘氨酸 2 2 2 盐酸硫胺素 0.5 0.5 0.5 盐酸吡哆醇 0.5 0.5 0.5 烟酸 0.5 0.5 0.5 6-BA 1～3 1～3 NiCl2 铁盐 有机成分 激素 凝固剂 1～2 IBA NAA 0.2～0.4 0.2～0.4 0.05～0.3 卡拉胶 21.3 21.3 21.3 pH 5.8 5.8 5.8 _________________________________ 3