WS 195--2001 前 军团病（legionnaires disease）是由军团菌属（legionella）、主要是嗜肺军团菌（legionella pneurmophi la)引起的一种细菌性呼吸道传染病。本病在全球普遍存在。我国已有小规模爆发及散发病例。由于军 团菌肺炎与其他肺炎不易区别，且老年人容易受到侵犯，一旦患病，病情相当严重。如治疗不当，其病死 率可高达15%～20%。为了对军团病患者提供可靠的诊断，进行合适的治疗，结合我国军团病防治工作 现状，特制定本标准。 本标准附录A中A2、A3、A1、附录B中B3、B4、B5、B6及附录C的诊断方法为参考诊断方法。 本标准由卫生部疾病控制司提出。 本标准负责起草单位：中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所；参加起草单位：协和医院。 本标准主要起草人：万超群、朱元珏、陆慰萱。 本标准由卫生部委托传染病防治监督管理办公室负贵解释。 行业标准信息服务平台 338 中华人民共和国卫生行业标准 军团病诊断标准及处理原则 WS 195—2001 Diagnostic criteria and principles of management of legionnaires disease 参照《中华人民共和国传染病防治法》及《中华人民共和国传染病防治法实施办法》制定本标准。 1范围 本标准规定了军团病的诊断标准及处理原则。 本标准适用于各级、各类型医疗保健、卫生防疫机构和人员对军团病病例的诊断和处理。 2诊断原测 2.1应根据流行病学资料及临床表现和常规实验室检验结果进行综合分析。 2.2确诊需依据病人双份血清军团菌抗体恢复期较急性期增高4倍或以上或军团菌培养阳性。 3诊断标准 3.1流行病学史 全年均可发病，多数发生在夏秋季节。中老年病例较为多见。有慢性肺病病史者、免疫功能低下者、 器官移植者、建筑工地施工人员、近两周内的旅行者以及吸烟者较易感。如发现两例或以上的成组病例， 应当进行血清流行病学调查。同时对可疑军团病患者的标本，如炭、血液、胸水、支气管肺泡灌洗液进行 军团菌的分离培养，还可从外环境如宾馆、医院、电影院等的空调系统冷却塔水、淋浴水、湖水、井水、池 水以及地表面污水中分离军团菌。 3.2临床表现 临床上可以有两种类型：非肺炎型（pontiacfever)和肺炎型。 3.2.1非肺炎型 临床表现类似感胃，症状：发热、咳嗽、头痛、肌痛和胸痛，但无肺炎。病程3～10天，可自愈。 3.2.2肺炎型 亚急性起病，症状：发热、头痛、寒颤、咳嗽或痰中带血，胸痛和肌痛，部分病人有恶心、呕吐、腹泻、相 对缓脉，有些患者尤其是儿童，可出现精神神经症状如谱妄、幻觉甚至昏迷等，重症病人可发生急性肾功 能衰竭、休克，或因菌血症产生的肺外器官感染。X线胸片显示肺有浸润性阴影，部分有胸腔积液，重症 病人有肺脓肿甚至空洞。 3.3常规实验室检查 多数血沉加快，血白细胞计数增高，部分有中性白细胞核左移，可能有乳酸脱氢酶、血清谷草转氨 酶、胆红素升高或有蛋白尿、低钠血症和低磷血症，血尿并不多见，但镜检时尿中可有红细胞。痰或气管 内抽吸物作革兰染色和一般培养。军团菌为革兰阴性杆菌，但初代分离菌革兰染色着色不明显，而且培 养的阳性率很低。 3.4特异性实验室检查（参见附录A、附录B、附录C） 3.4.1军团菌培养 中华人民共和国卫生部2001-07-20批准 2002-01-01实施 339 WS 195--2001 以痰、支气管抽吸物、支气管肺泡灌洗液或胸水为标本，在含N-2-乙酰氨基-2-氨基乙烷磺酸 （ACES）的酵母浸膏培养基（BCYE）中培养军团菌。 3.4.2细菌抗原检测 采用直接荧光抗体法（I)FA）。 3.4.3血清特异性抗体检测 采用间接荧光抗体法（IFA）、试管凝集试验（TA）等方法检测军团菌特异性抗体。起病时及3～8周 后网次血清军团菌抗体滴度呈4倍或以上增长，单次抗体大于1：256（1FA），或凝集抗体从1：404 倍或以上增长或一次凝集滴度为1：320(TA）者，可确定有军闭菌感染。 3.5病例分类 3.5.1临床诊断 满足3.1、3.2、3.3加3.4.2。 3.5.2确诊病例 满足3.1、3.2、3.3加3.4.1或3.4.2。 4处理原则（参见附录D) 4.1早期发现病人，早期治疗：对可疑病人应及时进行特异性实验室检查以明确诊断。确诊者可选用红 霉素、阿奇霉素等或和利福平一并使用.复方新诺明、四环素、环沙星、强力霉素对部分病人有效。应尽 量避免使用糖类皮质激素。 4.2早期发现并发症如急性肾功能衰竭、休克等应及时积极抢救。 4.3如发现成组病例，应向防疫部门报告。通过流行病学调查证实后，采取合适的防治措施，对被军团 菌污染的水源，如建筑物中的空调系统冷却塔水、冷热水管道系统水进行细菌学检测、必要时进行消毒 处理。对可疑者及易感人群选用红霉素、阿奇霉素等治疗。 行业标准信息服务平台 340 ws 195-2001 附录A （标准的附录） 军团病病原学诊断方法 A1直接荧光抗体染色检查法 本法操作简便，能快速发现各种被检病理标本中是否存在军团菌。但当标本中军团菌数量较少或病 原菌为荧光抗血清未包括的新种（型）时，结果常为阴性，故阴性结果不能排除军团病。 A1.1荧光抗体制备 A1.1.1用1%甲醛盐水自固体培养基上洗下军团菌菌苔，4C过夜杀菌，pH7.2操作PBS洗2次，配 制成4×10°/mL菌细胞的菌液。 A1.1.2免疫前自家免取血，用作对照血清，采取皮内注射法或静脉注射法免疫家免。如凝集反应效价 达到1：5120以上可以全放血，并分离血清。 A1.1.3免疫前兔血清与抗军团菌血清用50%、33%饱和度硫酸铵提取Y-球蛋白调整蛋白浓度为20 mg/mL。按常法用异硫氰酸荧光素（FITC)标记。 A1.2标本制备 A1.2.1肺组织：新鲜组织可制成印片或研磨成10%悬液后涂膜，于空气中干燥后加热固定，再在涂膜 上滴加10%中性甲醛固定10min。吸弃甲醛后用蒸馏水轻轻漂洗，干燥后镜检。如为甲醛固定组织，可 用力片切成组织块，造成新的组织面，用刀片呈直角在组织上刮取细微的组织颗粒糊，于载玻片上涂膜， 干燥后加热固定。 A1.2.2其他标本：痰、支气管灌洗液或抽出物、胸水（应注意抗凝）可选取粘性部分（胸水等也可离心 取沉淀物）涂膜，干燥后加热固定。10%中性甲醛固定10min，蒸馏水漂洗，干燥后染色镜检。可疑培养 物：用接种环挑取可疑菌落，混悬于1%甲醛等渗盐水中，涂膜，于燥，加热固定。 A1.3染色方法 A1.3.1荧光抗体工作溶液配制：将标准军团菌株用PBS制成悬液后涂片，使每高倍视野菌数500～ 600条，用不同稀释度的荧光抗体染色。凡出现3+～4+荧光强度的最高稀释度为1个效价单位（3十： 菌细胞发明亮的黄绿色荧光；4十：菌细胞发耀眼的黄绿色荧光）。常规工作中用2个效价单位作为工作 溶液。 A1.3.2操作：每份标本在同一张载片上作两个涂膜。一个用免疫前兔-球蛋白荧光素标记物染色，作 阴性对照；另一用荧光抗体染色。置37C湿盒中温育30min后用PBS洗去多余的荧光血清（洗时载片 加有荧光抗体的一侧向下），并用PBS浸洗2次（每次5min），蒸馏水冲洗1次，干燥，涂膜滴加pH9.0 缓冲甘油，盖玻片封固，荧光显微镜检查。 A1.4结果的解释：痰胸水、气管抽吸物或灌洗液等标本，每张涂膜上只要发现5条以上染色鲜明、形 态典型的军团菌，即可报告阳性。其他临床标本，每张涂片发现有≥25条强烈发荧光的细菌，报告为阳 性，1～24条为可疑，0条为阴性。 服务平 A2军团菌多重聚合酶链反应（MPCR）和产物检测（参考） A2.1寡核苷酸引物的合成 团菌，可产生206bp的产物（mip基因片段）。另一对引物为扩增16SrRNA用。不仅可检测嗜肺军团菌 种，而且可以检测某些非嗜肺军团菌种。 Itre