ICS 65.020.40 CCS B61 43 湖南省 地方 标准 DB 43/T 2772—2023 羊踯躅组培育苗技术规程 Code of practice for propogation via tissue culture of Rhododendron molle 2023 - 09 - 27发布 2023 - 12 - 27实施 湖南省市场监督管理局 发布 DB 43/T 2772 —2023 I 目次 前言................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 缩略语 ............................................................................ 1 5 无菌苗培养 ........................................................................ 1 6 处植体处理 ........................................................................ 2 7 组织培养 .......................................................................... 2 8 炼苗 .............................................................................. 2 9 移栽育苗 .......................................................................... 3 10 档案管理 ......................................................................... 3 DB 43/T 2772 —2023 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由湖南省林业局提出。 本文件由湖南省林业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：湖南省植物园、常德市鼎城区林业局。 本文件主要起草人：吴林世、廖菊阳、刘艳、李巧云、谢嘉浇、李曼、宋胤、王玲、易心钰、陈婵、 张娟、刘馨蕴、王亚如。 DB 43/T 2772 —2023 1 羊踯躅组培育苗技术规程 1 范围 本文件规定了羊踯躅（Rhododendron molle G.Don）组培育苗的无菌苗培养、外植体处理、组织培 养、炼苗、移栽育苗和档案管理等技术要求。 本文件适用于羊踯躅组培育苗。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 AC：活性炭粉（ Charcoal activated powder ） IBA：吲哚丁酸（ Indole-3-Butytrie acid） NAA：α-萘乙酸（α- Naphthylacetic acid ） TDZ：噻苯隆（ Thidiazuron ） WPM：木本植物培养基（ Woody Plant Madium ） ZT：玉米素（Zeatin ） 5 无菌苗培养 种子收集 9月～10月，当蒴果由青绿色转变为淡黄色时采集。置于干燥通风处阴干脱粒，置于 4℃冰箱冷藏备 用。 消毒灭菌 种子使用 75%的酒精浸泡10 s ，无菌水漂洗 1次，用5%次氯酸钠进消毒5 min ，2%氯化钙溶液清洗2 次，无菌水清洗 5次，备用。 诱导发芽 种子发芽培养基 WPM+TDZ1.0 mg/L+NAA0.5 mg/L。培养基分装完成后应在 10 h内进行湿热灭菌，灭 菌调节为 121℃，20 min。灭菌后培养基放再储存间，储存时间不超过7 d 。 DB 43/T 2772 —2023 2 消毒后每瓶接种10粒种子。培养基附加6.0 g/L 琼脂和30.0 g/L蔗糖，用0.1 mol/L 的氢氧化钠或氯 化氢调节pH 值至5.4～5.6，培养温度为（ 25±1）℃，光照强 度为1500 lx～ 2000 lx，每日光照时数12 h。 6 处植体处理 处植体制作 选取生长健壮的羊踯躅无菌苗嫩叶，除去叶梢和叶柄，并在叶片中部垂直于叶脉横切一刀，剪成边 长大约为 0.5 cm的正方形，备用。 接种 在超净工作台上，将叶片正面朝上平放于培养基上，每瓶接种 3个～4个外植体，酒精灯快速灼烧瓶 口一圈后密封，注明标签。 7 组织培养 培养条件 培养基附加 6.0 g/L琼脂和30.0 g/L蔗糖，调节 pH值至5.4～5.6，培养温度为（25 ±1）℃，光照强 度为1500 lx～2000 lx ，每日光照时数12 h。 初代培养 初代培养基为 WPM+ TDZ1.0 mg/L+NAA1.0 mg/L 。叶片在培养基上长出大量淡黄色的椭圆形颗粒，诱 导形成愈伤组织。愈伤组织培育至叶片周边生长出蓬松状、黄绿色的颗粒为宜。 分化培养 分化培养基为 WPM+ZT1.0 mg/L+NAA0.5 mg/L。将愈伤组织切割成小块放置培养基中，诱导分化长出 健壮的不定芽。不定芽颜色嫩绿，高 1.5 cm～2.0 cm 时进行下一步培养。 增殖培养 增殖培养基为 WPM+ZT1.5 mg/L+NAA1.0 mg/L 。丛生芽切割为 0.5 cm～1.0 cm的小块，转接至增殖培 养基上，得到大量的丛生芽。丛生芽高 2.5 cm～ 4.0 cm时进行生根培养。 生根培养 生根培养基为 WPM+IBA0.5 mg/L+AC3.0 g/L。将增殖丛生苗切割成单株后转接至生根培养基。 8 炼苗 质量要求 植株生长健壮，株高大于 2.5 cm，展叶数量大于3 片，新根数量大于 3条，可进行炼苗。 炼苗方法 炼苗后，培养瓶开盖后放置在有散射光的温室中培养 10 d～15 d，室温控制在（25 ±5）℃。