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ICS11.020 WS C50 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 341—2011 血红蛋白测定参考方法 Reference method for haemoglobinometry in human blood 行业标准信息服务平台 2011-09-30发布 2012-04-01实施 中华人民共和国卫生部 发布 WS/T 341—2011 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由卫生部临床检验标准专业委员会提出。 本标准主要起草单位:卫生部临床检验中心。 本标准主要起草人:彭明婷、谷小林、李臣宾、施丽飞、陆红、申子瑜。 行业标准信息服务平台 WS/T341-—2011 血红蛋白测定参考方法 1范围 本标准规定了血红蛋白测定参考方法的技术要求。 本标准适用于建立并运行血红蛋白测定参考方法的实验室。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 血红蛋白hemoglobin,HGB/Hb 存在于血液中所有的血红蛋白衍生物,包括脱氧血红蛋白、氧合血红蛋白、硫化血红蛋白、碳氧血红 蛋白和高铁血红蛋白。 2.2 氰化高铁血红蛋白 日haemiglobincyanide,HiCN 血红蛋白(除硫化血红蛋白外)中的亚铁离子被氧化成高铁离子,再与氰离子结合形成的血红蛋白 衍生物,即氰化高铁血红蛋白。 2. 3 参考方法referencemethod 一种可清楚和准确描述的用于特定检测的技术,该技术要有依据,可提供足够准确和精密的实验数 据以评价其他实验方法检测结果的有效性。若有决定性方法,参考方法的准确性必须与决定性方法进 行比较,并且应标示不准确度和不精密度。 3总则 为了保证参考方法检测结果的准确性,建立参考方法的实验室应与其他参考实验室进行结果比对。 4原理 血红蛋白分子中的亚铁离子(Fe2+)在溶液中被高铁氰化钾氧化成高铁离子(Fe+)形成高铁血红 蛋白(Hi),其后又与氰离子(CN-)反应生成氰化高铁血红蛋白(HiCN),HiCN在波长54Onm处有最 大吸收峰,HiCN吸光度严格遵循朗伯-比尔定律,即HiCN在波长54onm的吸光度值与HiCN浓度成 正比,血红蛋白浓度可由分光光度计所测定的吸光度值计算得出。 5一般技术要求 5.1设备 5.1.1玻璃器具 试验所用的玻璃器具应为A级。 WS/T341—2011 规格要求:正向置换式微量加样器或吸量管100μL士0.5μL、0.5mL士0.005mL,容量瓶25mL士 0.03mL、100mL±0.08mL250mL±0.12mL、1000mL±0.3mL。 5.1.2薄膜过滤器:由低蛋白结合和低释放材料制成,过滤器半径为25mm,薄膜孔径为0.20um~ 0.25μm。 5.1.3分光光度计:所用的分光光度计应经计量部门检定合格,仪器的狭缝宽度<2nm,配对比色杯 的内径为1.000cm±0.002cm。 5.2试剂(文-齐氏液,vanKampenandZijlstrareagent) 5.2.1文-齐氏液的组成 KCN 0.050g K,Fe(CN)6 0.200 g KH2PO(无水) 0.140 g 非离子表面活性剂 0.5mL~1.0mL 临床实验室试剂用水,I级 1000.0mL 临床实验室I级试剂用水应满足以下指标:细菌数<10CFU/mL,25℃条件下电阻抗>10mQ·cm; 硅含量(SiO2)<0.05mg/L。 所用化学试剂应为不含结晶水的分析纯。 非离子表面活性剂可使用NonidetP-40或TritonX-100。 试剂中的氰化钾为剧毒物质,应规定相应的生物安全防护和处理要求。 5.2.2试剂为清亮的淡黄色溶液,不吸收波长大于480nm的光。pH为7.0~7.4,渗透压为 6mOsm/(kg·H,O)~7mOsm/(kg·H,O)。试剂应可使血红蛋白在5min内完全转化成氰化高铁 血红蛋白。 5.2.3试剂应保存于较大且密封的棕色硼硅酸盐玻璃瓶内,室温避光保存,不能冷冻。如有浑浊物生 成,应重新配制。至少每月重新配制一次。 5.3血标本的采集 5.3.1用真空采血系统采集新鲜静脉血。采血时要避免皮肤消毒物质的污染。标本中不得有肉眼可 见的小凝块或溶血。 5.3.2采集标本时使用EDTA为抗凝剂,要求加入血液后抗凝剂的终浓度为3.7μmol/mL~5.4μmol/ mL,可以使用以下几种抗凝剂: EDTA·K,(相对分子质量368.4)浓度为1.4mg/mL~2.0mg/mL; EDTA·K,·2HzO(相对分子质量404.5),浓度为1.5mg/mL~2.2mg/mL; -EDTA·K,·2HO(相对分子质量442.5),浓度为1.6mg/mL~2.4mg/mL; -EDTA·Na2·2H2O(相对分子质量372.23),浓度为1.4mg/mL~2.0mg/mL。 5.3.3血液加入抗凝管后,管内剩余空间至少占试管体积的20%,以利于血标本的混匀。 5.3.4标本采集后应在当天完成测定。 6 测定步骤 6.1# 标本稀释 6. 1.1 取文-齐氏液加至容量为25mL的A级容量瓶中,将试剂液面调至刻度线 6.1.2用正向置换移液器吸取100μL混匀全血,使用蘸有盐水的纱布小心快速地擦掉毛细管外壁残 2
WS-T 341-2011 血红蛋白测定参考方法
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