ICS 11.220 B 41 团体标准 T/CVMA 14—2020 鸭坦布苏病毒 抗体血凝抑制检测方法 Hemagglutination - inhibition detection method for antibody against duck Tembusu virus 2020-5-20发布 2020-5-20实施 中 国 兽 医 协 会 发布 中国兽医协会 CVMA全国团体标准信息平台 T/CVMA 14—2020 目 次 前 言................................ ................................ ...... I 引 言................................ ................................ ..... II 1 范围................................ ................................ ...... 1 2 规范性引用文件 ................................ ............................ 1 3 术语和定义 ................................ ................................ 1 4 缩略语................................ ................................ .... 1 5 试剂和材料 ................................ ................................ 1 6 器材和设备 ................................ ................................ 2 7 血清样本的处理 ................................ ............................ 3 8 操作步骤 ................................ ................................ .. 3 9 结果判定 ................................ ................................ .. 5 附录A（规范性） 鸭坦布苏病毒血凝抑制试验抗原的制备 ........................... 6 附录B（规范性） 试剂配制 ................................ ..................... 7 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 T/CVMA 14—2020 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草。 本文件部分条款 涉及专利的使用。 本文件由中国兽医协会 提出并归口。 本文件起草单位：北京市农林科学院 、中国兽医药品监察所 。 本文件主要起草人： 林健、王小蕾、杨志远、 杨承槐、 段会娟、赵际成、刘立新、潘 洁、程慧敏、 侯力丹、 刘月焕。 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 T/CVMA 14—2020 Ⅱ 引 言 鸭坦布苏病毒病是由鸭坦布苏病毒（ Duck Tembusu virus ，DTMUV）引起的鸭生殖、免 疫和神经等多 系统脏器损伤的急性传染病 。以产蛋鸭产蛋骤然大幅下降和雏鸭出现神经症 状和死亡为主要特征，死亡率 可达20%。该病2010年起在福建、浙江、江苏、山东、河 北和北京等蛋鸭养殖区流行，给鸭产业造成了巨大的经济损失。 鸭坦布苏病毒属于黄病毒属， 目前国际上通用的黄病毒属血清学检测方法有酶联免疫 吸附试验 (ELISA)、琼脂扩散试验 (AGP)、血凝抑制试验 (HI)、补体结合试验 (CFT)和中和试 验(NT)等。其中， HI方法具有敏感、简便的优点，在定性的同时也可以定量检测，并且不 需要特殊仪器设备，更适合基层应用。 检测诊断是疫病防制的基础，研发准确、快捷的鸭坦布苏病毒病检测 方法，对当前防 控鸭坦布苏病毒病具有重要意义。 北京市农林科学院 通过暴露病毒粒子血凝特性工艺的研 究，制备了鸭坦布苏病毒 HI试验抗原，并建立了鸭坦布苏病毒抗体 HI检测方法，该方法 敏感、特异，易于操作，能快速定量检测鸭坦布苏病毒抗体水平。 制定该病的检测技术标准，将有助于保障养鸭业健康发展，预防该病的传播与危害， 提高对该病的检测技术。 本文件的发布机构提请注意，申明符合本文件时，可能涉及到 5.1、8与抗原制备及检 测操作方法相关的专利的使用。 本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。 该专利持有人已向本文件的发布机构保证，他愿意 在公平、合理、无歧视基础上，免 费许可任何组织或者个人在实施 本文件时实施专利 。该专利持有人的声明已在本文件的发 布机构备案。相关信息可以通过以下联系方式获得： 专利持有人：北京市农林科学院 联系人：刘月焕 地址：北京市海淀区曙光花园中路 9号 北京市农林科学院 邮编：100097 请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担 识别这些专利的责任。 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 T/CVMA 14—2020 1 鸭坦布苏病毒抗体血凝抑制检测方法 1 范围 本文件规定了鸭坦布苏病毒（ Duck Tembusu virus ，DTMUV）抗体血凝抑制 检测方法 的 缩略语、试剂和材料、器材和设备、血清样 本的处理、操作步骤、结果判定 。 本文件适用于鸭和鹅等水禽鸭坦布苏病毒抗体的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期 的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括 所有的修改单）适用于本文件。 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 NY/T 1948 兽医实验室生物安全要求通则 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本 文件。 BABS：牛血清白蛋白硼酸氯化钠溶液（ Bovine Serum Albumin Boric Acid Sodium Chloride Solution ） DID50：鸭半数感染量（Duck Median Infective Dose ） HA：血凝反应 （Hemagglutination ） HI：血凝抑制 反应（Hemagglutination -Inhibition ） HAU：血凝单位 （Hemagglutination Unit ） PBS：磷酸盐缓冲溶液 （Phosphate Buffered Saline） VAD：病毒调整稀释液（ Virus Adjusting Diluent） 5 试剂和材料 5.1 鸭坦布苏病毒 血凝抑制试验抗原 按照附录A制备。 5.2 标准阳性血清 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 T/CVMA 14—2020 2 鸭坦布苏病毒 （HB株）用无菌0.5%乳汉液（按照附录B.1制备）稀释成100 DID 50 /0.5 mL，以0.5 mL /只的剂量 经肌肉注射途径接种1~4月龄未做任何疫苗免疫、无传染 病史、无明显临床症状的 健康鸭，感染后 14 d采集血液分离 血清制备而成，HI试验检测 鸭 坦布苏病毒 抗体效价 ≥1:80。 5.3 标准阴性血清 采集1~4月龄未做任何疫苗免疫、无传染病史、无明显临床症状的 健康鸭血液，分离 血清制备而成 ，HI试验检测鸭坦布苏病毒抗体 效价＜1:10。 5.4 鹅红细胞悬液 按照附录B.2制备。 5.5 0.33%工作浓度的鹅红细胞悬液 按照附录B.3制备。 5.6 10%工作浓度的鹅红细胞悬液 按照附录B.4制备。 5.7 阿氏液 按照附录B.5制备。 5.8 PBS（0.01 mol/L，pH 7.2） 按照附录B.6制备。 5.9 VAD： 按照附录B.7制备。 5.10 硼酸氯化钠溶液 按照附录B.8制备。 5.11 BABS 按照附录B.9制备。 5.12 25%白陶土悬浊液 按照附录B.10制备。 6 器材和设备 应配备如下器材和设备： ——恒温培养箱：37℃±1℃； ——冰箱：2℃~8℃； ——低速离心机； ——微量板振荡器； ——单道和多道 微量移液器 及吸头： 10 µL~100 µL； ——离心管：1.5 mL、15 mL； 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 T/CVMA 14—2020 3 ——96孔U型微量板； ——湿盒：商品化湿盒或自制，即 塑料保鲜盒或铝制饭盒内置湿纱布。 7 血清样