(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111295722.0 (22)申请日 2021.11.03 (71)申请人 深圳市人民医院 地址 518000 广东省深圳市罗湖区翠竹街 道东门北路1017号大院 (72)发明人 李志杰　王继刚　郑六海　杨传彬　 袁吉民　陈昆　 (74)专利代理 机构 深圳市科吉华烽知识产权事 务所(普通 合伙) 44248 代理人 胡吉科 (51)Int.Cl. C07K 16/18(2006.01) C07K 19/00(2006.01) C12N 15/13(2006.01) C12N 5/10(2006.01)A61K 49/00(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) G01N 33/68(2006.01) G01N 33/574(2006.01) (54)发明名称 靶向钙网蛋白的纳米抗体及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种靶向钙网蛋白的纳米抗 体及其应用， 所述靶向钙网蛋白的纳米抗体的氨 基酸序列的互补决定区为如SEQ  ID NO:2所示的 CDR1、 如SE Q ID NO:4所示的CDR2、 如 SEQ ID NO: 6所示的CDR3； 或如SEQ  ID NO:9所示的CDR1、 如 SEQ ID NO:11所示的CDR2、 如SEQ  ID NO:13所示 的CDR3。 本发明的2 04和215纳米抗体， 通过与CRT 结合情况的验证， 显示了其与CRT蛋白具有很强 的结合力， 而且与CRT蛋白的亲和力均在纳摩尔 水平， 具有较高的亲和力； 而且该纳米抗体更好 的组织穿透性， 可以使用大肠杆菌系统进行表达 纯化， 制备成本极大地降低。 权利要求书1页 说明书7页 序列表5页 附图6页 CN 114395037 A 2022.04.26 CN 114395037 A 1.靶向钙网蛋白的纳米抗体， 其特征在于： 所述靶向钙网蛋白的纳米抗体的氨基酸序 列的互补决定区为如SEQ  ID NO:2所示的CDR1、 如SEQ  ID NO:4所示的CDR2、 如SEQ  ID NO:6 所示的CDR3； 或如SEQ ID NO:9所示的CDR1、 如SEQ  ID NO:11所示的CDR2、 如SEQ  ID NO:13所示的 CDR3。 2.根据权利要求1所述的靶向钙网蛋白的纳米抗体， 其特征在于： 所述靶向钙网蛋白的 纳米抗体的氨基酸序列的框架区为SEQ  ID NO:1所示的FR1、 如SEQ  ID NO:3所示的FR2、 如 SEQ ID NO:5所示的FR3、 如SEQ  ID NO:7所示的FR4。 3.根据权利要求2所述的靶向钙网蛋白的纳米抗体， 其特征在于： 所述靶向钙网蛋白的 纳米抗体的氨基酸序列如SEQ  ID NO:15所示。 4.根据权利要求1所述的靶向钙网蛋白的纳米抗体， 其特征在于： 所述靶向钙网蛋白的 纳米抗体的氨基酸序列的框架区为SEQ  ID NO:8所示的F R1、 如SEQ  ID NO:10所示的FR2、 如 SEQ ID NO:12所示的FR3、 如SEQ  ID NO:14所示的FR4。 5.根据权利要求4所述的靶向钙网蛋白的纳米抗体， 其特征在于： 所述靶向钙网蛋白的 纳米抗体的氨基酸序列如SEQ  ID NO:16所示。 6.一种核酸， 其特征在于， 所述核酸为： 编码权利要求1~5任意一项所述的靶向钙网蛋 白的纳米抗体的核酸或其互补序列。 7.一种表达载体， 其包 含权利要求6所述的核酸。 8.一种宿主细胞， 其包 含权利要求7 所述的表达载体。 9.权利要求1~5任意一项所述的靶向钙网蛋白的纳米抗体的应用， 其特征在于， 其用作 靶向钙网蛋白的检测试剂、 活体成像探针、 嵌和抗原受体修饰的细胞治疗产品或治疗性抗 体。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114395037 A 2靶向钙网蛋白的纳米抗体及其应用 技术领域 [0001]本发明属于免疫学或分子生物学技术领域， 尤其涉及一种靶向钙网蛋白的纳 米抗 体及其应用。 背景技术 [0002]多个靶向实体肿瘤相关抗原 （tumor  associated  antigens， TAAs） 的单克隆抗体 在肿瘤的靶向治疗中得到广泛使用， 经典的该类单克隆抗体如EGFR抗体、 Her2抗体以及 VEGF抗体在相应分子表达阳性的结直肠癌、 肺癌、 头颈部肿 瘤、 胃癌、 胶质瘤、 卵巢癌、 宫颈 癌、 肾癌以及乳腺癌等肿瘤治疗中已被证实具有较好的疗效。 同时基于上述单克隆抗体的 衍生药物如双特异抗体 （bispecfic  antibody）、 抗体偶联药物 （antibody  drug  conjugates, ADC） 以及嵌合型受体T细胞 （chimeric  antigen receptor T cells, CAR‑T） 均有在临床试验各阶段进行尝试， 其中Her2抗体偶联药物T ‑DXd （trastuzmab  deruxtecan） 已经被批准用于 胃癌的治疗。 但是绝大部分肿瘤相关抗原均在部分正常组织适量表达， 上 述药物 （单克隆抗体或衍生药物） 均存在靶向表达该分子的正常组织而诱发的非肿瘤相关 靶向效应从而产生副作用 （on ‑target off‑tumor adverse effects） ， 如EGFR/CD3双特异 性抗体对表达EGFR的正常组织产生严重的损害作用， HER2/CD3双特异性抗体也存在相同问 题， 多种CAR ‑T （Chimeric Antigen Receptor T‑Cell Immunotherapy， 嵌合抗原受体T细胞 免疫疗法） 疗法如 （gp ‑100 CAR T, CMA CAR‑T等） 存在对表达相应分子的正常组织攻击而 产生严重的副作用， 这些副作用极大的限制了如上 药物的临床应用。 [0003]虽然肿瘤特异 性抗原 （tumor  specific  antigens, TSAs） 被认为是由于肿瘤细胞 内基因突变、 重排或者病毒感染而产生的一类新抗原， 其可由肿瘤细胞通过MHCI类分子递 呈到细胞表面而被免疫系统识别， 但是筛选可作为药物靶点的TSA （tumor  specific   antigen， 肿瘤特异 性抗原） 以及 有效的筛选方法均限制了靶向TSA的药物发展， 肿瘤细胞具 有大量的突变， 但是仅仅极少一部分能够满足抗原特性来作为药物靶点； 而且肿瘤强烈的 异质性和患者明显的个体差异， 均使得靶向TSA或者通过TSA制备肿瘤疫苗具有极大的挑 战。 因此， 发展新的靶向药物策略并开发相对广谱适用的靶向药物在抗肿瘤药物研究中具 有重要意 义。 [0004]肿瘤免疫原性死亡 （immunogenic  cell death， ICD） 是一种免疫相关 的调控性死 亡模式， 其可以激发而非抑制机体T细胞针对正在发生死亡的癌细胞的免疫反应； 其主要 特 征是引起癌细胞大量转位或释放免疫刺激分子， 也即发生肿瘤细胞损伤相关分子模式 （damage  associated  molecular  patterns， DAMPs） 反应， 目前研究已发现某些化疗药物 （如阿霉素 （adriamycin） 、 蒽环类药物 （anthracyclines） 、 表阿霉素 （epirubicin） 、 米托葱 醌 （mitoxantrone， MTX） 和奥沙利铂 （oxaliplatin， OXP） 等） 、 光热治疗 （photothermal   therapy， PTT） 、 光动力疗法 （photodynamic  therapy, PDT） 、 放疗等肿瘤治疗方法均可诱导 ICD的发生。 [0005]ICD的核心事件是DAMP分子的转位或者释放， 主要包括如下三个层级： 1） 内质网应说　明　书 1/7 页 3 CN 114395037 A 3