(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111394707.1 (22)申请日 2021.11.23 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114106200 A (43)申请公布日 2022.03.01 (73)专利权人 广州百暨基因科技有限公司 地址 510000 广东省广州市经济技 术开发 区科学城开源大道 206号第3层 (72)发明人 李光超　罗敏　王学俊　刘劲松　 周兆　 (74)专利代理 机构 华进联合专利商标代理有限 公司 44224 专利代理师 王天庆 (51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01)C12N 15/62(2006.01) C12N 15/85(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 35/17(2015.01) A61P 35/00(2006.01) (56)对比文件 王晓桃等.多发性骨髓瘤 骨髓单个核细胞 CCR1和CCR5的表达及临床意 义. 《临床肿瘤学杂 志》 .2009,第14卷(第6期),520 -523. 审查员 陈晋 (54)发明名称 靶向CCR1的嵌合抗原受体及其应用 (57)摘要 本发明涉及一种靶向CCR1的嵌合抗原受体 及其应用， 包括从氨基端到羧基端依次连接的靶 向CCR1的单链抗体、 铰链区、 跨膜结构域、 共刺激 结构域和 信号转导结构域； 所述靶向CCR1的单链 抗体包括抗CCR1抗体轻链可变区和抗CCR1抗体 重链可变区， 所述抗CCR1抗体轻链可变区的氨基 酸序列如SEQID  NO： 1所示， 所述抗CCR1抗体重链 可变区的氨基酸序列如SEQ  ID NO： 2所示。 利用 本发明上述靶向CCR1的嵌合抗原受体构建的 CAR‑T细胞， 对CCR1阳性肿瘤细胞具有特异性靶 向作用， 体内外杀伤作用显著， 能够有效清除 CCR1阳性肿瘤细胞， 在肿瘤治疗领域具有重要 意 义。 权利要求书1页 说明书8页 序列表4页 附图5页 CN 114106200 B 2022.07.15 CN 114106200 B 1.一种靶向CCR1的嵌合抗原受体， 其特征在于， 包括从氨基端到羧基端依次连接的靶 向CCR1的单链抗体、 铰链区、 跨膜结构域、 共刺激结构域和信号转导结构域； 所述靶向CCR1 的单链抗体包括抗CCR1抗体轻链可变区和抗CCR1抗体重链可变区， 所述抗CCR1抗体轻链可 变区的氨基酸序列如SEQ  ID NO： 1所示， 所述抗CCR1抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ   ID NO： 2所示。 2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体， 其特征在于， 所述铰链区选自以下至少一种蛋 白的铰链区： CD28、 CD3ε、 CD45、 CD4、 CD5、 CD8、 CD9、 CD16、 CD22、 CD33、 CD37、 CD134、 CD137、 ICOS和CD154； 和/或 所述跨膜结构域选自以下至少一种蛋白的跨膜区： T细胞受体的α、 β 或ζ链、 CD28、 CD3ε、 CD45、 CD4、 CD5、 CD8、 CD9、 CD16、 CD22、 CD33、 CD37、 CD64、 CD80、 CD86、 CD134、 CD137、 CD154、 KIRDS2、 OX40、 CD2、 CD27、 ICOS、 GITR、 CD40、 BAFFR、 HVEM、 SLAMF7、 NKp80、 CD160、 CD19、 IL2Rβ 、 IL2Rγ、 IL7Rα、 ITGA1、 VLA1、 CD49a、 ITGA4、 IA4、 CD49D、 ITGA6、 VLA ‑6、 CD49f、 ITGAD、 CD11d、 ITGAE、 CD103、 ITGAL、 LFA ‑1、 ITGAM、 CD11b、 ITGAX、 CD11c、 ITGB1、 CD29、 ITGB2、 ITGB7、 TNFR2、 DNAM1、 SLAMF4、 CD84、 CD96、 CEACAM1、 CRTAM、 Ly9、 PSGL1、 CD100、 SLAMF6、 SLAM、 BLAME、 SELPLG、 LTBR、 PAG/ Cbp、 NKp4 4、 NKp30、 NKp46、 NKG2D、 和NKG2C； 和/或 所述共刺激结构域选自以下至少一种蛋白的胞内结构域： CD27、 CD28、 4 ‑1BB、 OX40、 CD30、 CD40、 P D‑1、 ICOS、 淋巴细胞功能相关抗原 ‑1、 CD2、 CD7、 L IGHT、 NKG2C和B7 ‑H3； 和/或 所述信号转导结构域选自以下至少一种蛋白的胞 内结构域： FcRγ、 FcRβ 、 CD3γ、 CD3δ、 CD3 ε、 CD3ζ、 CD2 2、 CD79a、 CD79b和CD6 6d。 3.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体， 其特征在于， 所述嵌合抗原受体的氨基酸序列 如SEQ ID NO： 4所示。 4.根据权利要求1～3任一项所述的嵌合抗原受体， 其特征在于， 所述嵌合抗原受体的 氨基端还具有信号肽。 5.一种核酸， 其特 征在于， 其编码权利要求1～4任一项所述的嵌合 抗原受体。 6.根据权利要求5所述的核酸， 其特征在于， 所述核酸的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 5所 示。 7.一种重组载体， 其特 征在于， 所述重组载体含有权利要求5或6所述的核酸。 8.一种CAR ‑T细胞， 其特征在于， 其含有权利要求5或6所述的核酸或被权利要求7所述 的重组载体所转 化。 9.权利要求1～4任一项所述的嵌合抗原受体、 权利要求5或6所述的核酸、 权利要求7所 述的重组载体或权利要求8所述的CAR ‑T细胞在制备用于治疗多发性骨髓瘤或急性髓系白 血病的药物中的应用。 10.一种药物组合物， 其特征在于， 包括权利要求8所述的CAR ‑T细胞， 以及药学上可接 受的辅料。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114106200 B 2靶向CCR1的嵌合 抗原受体及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物技术领域， 特别是涉及一种靶向CC R1的嵌合抗原受体及其应 用。 背景技术 [0002]近年来， 嵌合抗原受体T细胞(CAR  T)疗法在肿瘤治疗中展现出非常好的疗效。 CAR‑T疗法的全称是Chi meric antigen receptor T cell therapy， 即嵌合抗原受体T细胞 疗法， 原理是应用患者自身的T淋巴细胞， 经过实验室重新改造， 装载上具有识别肿瘤抗原 的受体及 共刺激分子， 体外扩增 后再次回输入患者体内， 从而识别并攻击自身的肿瘤细胞。 T细胞也叫T淋巴细胞， 是人体白细胞的一种， 来源于骨髓造血干细胞， 在胸腺中成熟， 然后 移居到人体血液、 淋巴和周围组织器官， 发挥免疫功能， 其能够抵御和消灭感染、 肿瘤、 外来 异物等。 在实验室， 技术人员通过基因工程技术， 将T细胞激活， 并装上定位导航装置CAR(嵌 合抗原受体)， 将T细胞改造成CAR ‑T细胞， 其利用嵌合抗原受体， 专门识别体内肿瘤细胞， 并 通过免疫作用释放大量的多种效应因子， 它们能高效地杀灭肿瘤细胞， 从而达到治疗恶性 肿瘤的目的。 [0003]但是， 目前针对不同肿瘤靶点且肿瘤细胞杀伤效果较好的嵌合抗原受体仍然较缺 乏。 发明内容 [0004]基于此， 有必要提供一种能够靶向C CR1且能高效杀灭肿瘤 细胞的嵌合 抗原受体。 [0005]一种靶向CC R1的嵌合抗原受体， 包括从氨基端到羧基端依次连接的靶向CC R1的单 链抗体、 铰链区、 跨膜结构域、 共刺激结构域和信号转导结构域； 所述靶向CCR1的单链抗体 包括抗CCR1抗体轻链可变区和抗CCR1抗体重链可变区， 所述抗CCR1抗体轻链可变区的氨基 酸序列如SEQ  ID NO： 1所示， 所述抗CCR1抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ  ID NO： 2所 示。 [0006]本发明构建了一种靶 向CCR1的嵌合抗原受体， 其包括靶 向CCR1的单链抗体、 铰链 区、 跨膜结构域、 共刺激结构域和信号转导结构域， 靶向CCR1的单链 抗体的轻链可变区和重 链可变区的氨基酸序列分别如SEQ  ID NO： 1和SEQ  ID NO： 2所示。 利用本发明上述靶向CCR1 的嵌合抗原受体构建的CAR ‑T细胞， 对CCR1阳性肿瘤细胞具有 特异性靶向作用， 经实验证明 表达上述靶向CCR1的嵌合抗原受体的T细胞体内外杀伤作用显著， 能够有效清除CCR1阳性 肿瘤细胞， 在肿瘤治疗领域具有重要意 义。 [0007]在其中一个实施例中， 所述铰链区选自以下至少一种蛋白的铰链区： CD28、 CD3ε、 CD45、 CD4、 CD5、 CD 8、 CD9、 CD16、 CD2 2、 CD33、 CD37、 CD134、 CD137、 ICOS和CD154； 和/或 [0008]所述跨膜结构域选 自以下至少一种蛋白的跨膜区： T细胞受体的α、 β 或ζ链、 CD28、 CD3ε、 CD45、 CD4、 CD5、 CD8、 CD9、 CD16、 CD22、 CD33、 CD37、 CD64、 CD80、 CD86、 CD134、 CD137、 CD154、 KIRDS2、 OX40、 CD2、 CD27、 ICOS、 GITR、 CD40、 BAFFR、 HVEM、 SLAMF7、 NKp80、 CD160、 CD19