(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111293361.6 (22)申请日 2021.11.03 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113943379 A (43)申请公布日 2022.01.18 (73)专利权人 浙江工业大 学 地址 310014 浙江省杭州市下城区潮王路 18号 (72)发明人 钟卫鸿　金维华　陈颖　何新月　 (74)专利代理 机构 浙江千克知识产权代理有限 公司 33246 专利代理师 赵芳 (51)Int.Cl. C08B 37/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01)审查员 李佳佳 (54)发明名称 烟草废弃物水提液中多糖的提取方法及其 应用 (57)摘要 本发明公开了烟草废弃物水提液中多糖的 提取方法及其在抑制肿瘤细胞中的应用， 提取方 法包括制备粗多糖、 脱色、 层析纯化， 前述多糖可 应用于抑制人非小细胞肺癌细胞A549。 本发明能 够很好地提取、 分离、 纯化烟草废弃物水提液中 的多糖， 并能对A549取得良好的抑制效果。 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 CN 113943379 B 2022.09.02 CN 113943379 B 1.烟草废弃物水提液中多糖在制备抑制人非小细胞肺癌细胞A549的药物中的应用， 其 特征在于， 多糖的提取 方法包括下述 步骤： 1)粗多糖制备 1.1)量取烟草废弃物水提液， 加入等比例的蒸馏水， 80 00rpm离心 20min； 1.2)将上清液边搅拌边倒入4 倍体积的无 水乙醇中， 保鲜膜封口， 室温醇沉过夜； 1.3)倒掉上清， 保留沉淀， 加入蒸馏水复溶， 得到粗多糖溶 液。 2.如权利要求1所述的应用， 多糖的提取 方法还包括下述 步骤： 2)将粗多糖溶液置于烧杯中， 用氢氧化钠溶液调pH至9.0， 逐滴加入30％H2O2并搅拌， 30％H2O2用量为10％， 6 0℃水浴搅拌3 h， 冷却静置， 抽滤， 保留滤 液。 3.如权利要求1所述的应用， 多糖的提取 方法还包括下述 步骤： 2)往粗多糖溶液中加入质量比50％的AB ‑8大孔吸附树脂， 放入30℃、 180rpm的摇床振 荡4h， 抽滤， 保留滤 液。 4.如权利要求1所述的应用， 多糖的提取 方法还包括下述 步骤： 2)往粗多糖溶液中加入质量比50％的AB ‑8大孔吸附树脂， 放入30℃、 180rpm的摇床振 荡4h， 抽滤， 保留AB ‑8大孔吸附树脂， 加入50％乙醇， 放入30℃、 180rpm的摇床中振荡4h， 抽 滤， 保留滤 液。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113943379 B 2烟草废弃物水提液中多糖的提取方 法及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物工程领域， 特别涉及到烟草废弃物水提液中多糖的提取、 分离纯 化方法及活性探究。 背景技术 [0002]在造纸法再造烟叶的工艺流程中， 使用水浸提烟草废弃物， 经过固液分离、 薄膜浓 缩获得了高浓度烟草废弃物水提液(Tobacco  waste extract， TWE)， 是造纸法再造烟叶一 种十分重要的中间产物。 TWE这种高浓度的水提取液， 含有大量的烟草内源水溶性化合物， 密度为1.3g/cm3， pH值为4， 还原糖含量为163.8g/L， 尼古丁含量为19.5g/L(根据具体的工 艺及烟草原料， 其具体数值会有些变化)， 可知TWE中的糖含量极高。 [0003]作为一种植物多糖， 可能像大多数由醛糖或酮糖缩合而成的天然高分子聚合物一 样， 具有降血糖降血脂、 抗氧化、 增强免疫、 抗肿 瘤、 抗疲劳、 抑菌等功能活性， 从而在药品、 食品、 保健品、 护肤品等方面获得应用。 然而， 迄今对于烟草多糖的研究主要致力于提高卷 烟的感官质量， 而对其活性尤其是抗肿瘤方面的研究应用较少。 发明内容 [0004]本发明的目的是从TWE原液中提取 得到多糖， 并研究其在抑制肿瘤中的应用。 [0005]为此， 本发明采用的技 术方案是这样的： [0006]烟草废弃物水提液中多糖的提取 方法， 包括下述 步骤： [0007]1)粗多糖制备 [0008]1.1)量取烟草废弃物水提液， 加入等比例的蒸馏水， 80 00rpm离心 20min； [0009]1.2)将上清液边搅拌边倒入4 倍体积的无 水乙醇中， 保鲜膜封口， 室温醇沉过夜； [0010]1.3)倒掉上清， 保留沉淀， 加入蒸馏水复溶， 得到粗多糖溶 液。 [0011]进一步地， 还包括下述 步骤： [0012]2)将粗多糖溶液置于烧杯中， 用氢氧化钠溶液调pH至9.0， 逐滴加入30％H2O2并搅 拌， 30％H2O2用量为10％， 6 0℃水浴搅拌3 h， 冷却静置， 抽滤， 保留滤 液； [0013]或者采用这样的步骤： [0014]2)往粗多糖溶液中加入质量比50％的AB ‑8大孔吸附树脂， 放入30℃、 180rpm的摇 床振荡4h， 抽滤， 保留滤 液； [0015]又或者采用这样的步骤： [0016]2)往粗多糖溶液中加入质量比50％的AB ‑8大孔吸附树脂， 放入30℃、 180rpm的摇 床振荡4h， 抽滤， 保留AB ‑8大孔吸附树脂， 加入50％乙醇， 放入30℃、 180rpm的摇床中振荡 4h， 抽滤， 保留滤 液。 [0017]更进一步地， 还包括下述 步骤： [0018]3)粗多糖层析 纯化 [0019]3.1)将上步所 得的粗多糖溶 液透析冻干；说　明　书 1/5 页 3 CN 113943379 B 3