(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111422360.7 (22)申请日 2021.11.26 (71)申请人 郑州大学 地址 450000 河南省郑州市高新 技术开发 区科学大道100号 (72)发明人 王尧河　周文平　苗晋鑫　 (74)专利代理 机构 北京三高永信知识产权代理 有限责任公司 1 1138 专利代理师 邢少真 (51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 5/10(2006.01) C12N 15/867(2006.01) A61K 38/20(2006.01)A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) (54)发明名称 新型嵌合 抗原受体以及包 含其的免疫细胞 (57)摘要 本发明为新型嵌合抗原受体以及包含其的 免疫细胞， 涉及一种能特异性结合肿瘤特异性标 识的融合蛋白和能表达该融合蛋白的免疫细胞， 例如T细胞或NK细胞。 本发明的融合蛋白可以包 含嵌合抗原受体(CAR)、 白介素12(IL12)和氧依 赖性降解区域(ODD)。 本发明的CAR包含胞外 结构 域、 跨膜结构域和胞内结构域， 所述的胞外结构 域能够特异性结合肿瘤特异性抗原， 并通过跨膜 结构域和胞内结构域激活T或NK细胞。 本发明提 供的CAR‑T细胞或NK细胞， 其以肿瘤特异性标识 为靶， 利用CAR ‑T细胞或NK细胞特异性地杀伤肿 瘤细胞， 例如骨髓瘤或白血病。 本发明的CAR ‑T或 NK细胞可作为肿瘤类疾病的治疗药物， 为肿瘤的 预防和治 疗提供了新的方法。 权利要求书2页 说明书18页 序列表13页 附图3页 CN 114907487 A 2022.08.16 CN 114907487 A 1.一种嵌合抗原受体(CA R)， 其包含(1)胞外抗原结合域； (2)跨膜域； 和(3)胞内信号传 导域， 其特征在于， 所述CAR还包含与所述胞内结构域连接并共表达的 白介素12(IL12)与氧 依赖性降解区域(ODD)的融合蛋白， 任选地， 所述胞内结构域与所述融合蛋白通过自剪切蛋 白(例如选自由T2 A、 P2A、 E2A、 F2A、 或其组合组成的组)连接 。 2.根据权利要求1所述的CAR， 其中所述跨膜域来源于选自由T细胞受体的α、 β或ζ链、 CD3ε、 CD4、 CD5、 CD8、 CD8α、 CD9、 CD16、 CD22、 CD28、 CD33、 CD37、 CD45、 CD80、 CD86、 CD134、 CD137、 CD152、 CD154和ICOS组成的组中的一种或多种的跨膜结构域。 3.根据权利要求1所述的CAR， 所述胞内信号转导域包含共刺激信号传导域且来自： CD2、 CD3ζ、 CD3γ、 CD3δ、 CD3ε、 CD4、 CD5、 CD7、 CD22、 CD27、 CD28、 CD30、 CD40、 CD66d、 CD79a、 CD79b、 CD83、 CD134、 CD137、 ICOS、 CD154、 4 ‑1BB和OX40、 LFA ‑1、 LIGHT、 NKG2C和B7 ‑H3中的一 种或多种。 4.如权利 要求1‑3中任一项所述的CA R， 还包含位于所述胞外抗原结合域的C ‑末端和所 述跨膜域的N ‑末端之间的铰链域。 5.如权利要求 4所述的CAR， 其中所述铰链域 来源于CD8α 。 6.如权利要求1所述的CAR， 其中胞外抗原结合域是能结合肿瘤细胞表面抗原(例如 CD19， CD20、 CD22、 CD123、 CD30、 CD33、 CD38、 CD44、 CD138、 CD276、 EGFR、 BCMA， HER1、 HER2、 HER3、 EpCAM、 间皮素(mesothelin)、 FAP(Fib roblast activation  protein)、 Glypican ‑3、 CEA、 PSMA、 IL13Rα 2、 CD171、 GD2、 CEACAM6、 CLDN4、 CLDN18.2、 NKGD2、 LAMC2、 CA9、 CST 1、 EPPK1 和ANO1中的一种或多种)的分子， 例如抗体(Ig、 Ig  NAR、 Fab片段、 Fab ’片段、 F(ab) ’2片段、 F (ab)’3片段、 Fv、 scFv、 双 ‑scFv、 (scFv)2、 微型抗体、 双链抗体、 三链抗体、 四链抗体、 二硫键 稳定的Fv蛋白以及单 结构域抗体(sdAb， 纳米抗体)、 双特异性 抗体或三特异性 抗体)。 7.如权利要求1所述 的CAR， 其中所述IL12具有SEQ  ID NO:5的氨基酸序列； 所述ODD具 有SEQ ID NO： 7的氨基酸序列， 优选地， 所述CAR包含SEQ  ID NO： 1和SEQ  ID NO:3所示的氨 基酸序列。 8.如权利要求1所述的融合蛋白， 其还 包含标签序列(例如Po ly‑His、 Hemagglutinin、 c‑Myc、 GST、 Fla g‑tag等)或IgG1 ‑Fc蛋白序列。 9.核苷酸， 其编码权利要求1 ‑8中任一项所述的CAR， 优选地， 所述核苷酸序列包含SEQ   ID NO:2所示的核苷酸序列， 或包含SEQ  ID NO:2‑SEQ ID NO:10‑SEQ ID NO:4依次连接的 核苷酸序列。 10.分离的CAR ‑T细胞或CAR ‑NK细胞或单核巨噬细胞， 其特征在于， 所述CAR ‑T细胞或 CAR‑NK细胞或单核巨噬细胞能够表达权利要求1 ‑8中任一项所述的CAR； 所述CAR ‑T细胞或 CAR‑NK细胞或单核巨噬细胞包 含权利要求9中所述的多 核苷酸。 11.载体， 其包 含根据权利要求9所述的多 核苷酸。 12.如权利要求11所述的载体， 其中所述载体是表达载体， 例如病毒载体， 优选为逆转 录病毒载体或溶瘤病毒， 例如慢病毒 载体， 优选为选自人免疫缺陷病毒1(HIV ‑1)、 人免疫缺 陷病毒2(HIV ‑2)、 维斯纳 ‑梅迪病毒(VMV)病毒、 山羊关节炎 ‑脑炎病毒(CAEV)、 马传 染性贫 血病毒(EIAV)、 猫免疫缺陷病毒(FIV)、 牛免疫缺陷病毒(BIV)、 猿 猴免疫缺陷病毒(SIV)、 腺 病毒和痘病毒。 13.药物组合物， 其包含权利要求1 ‑8中任一项所述的嵌合抗原受体， 包含如权利要求权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114907487 A 210所述的细胞， 以及任选地， 药 学上可接受的载体。 14.制备权利要求10所述的细胞的方法， 其包括将权利要求11或12的载体引入至T淋巴 细胞或自然杀伤细胞或单核巨噬细胞。 15.权利要求1 ‑8中任一项所述的细胞在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途， 示 例性地， 所述癌症为骨髓瘤和白血病。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114907487 A 3