(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111367763.6 (22)申请日 2021.11.18 (71)申请人 中南大学湘雅三医院 地址 410013 湖南省长 沙市桐梓坡路138号 中南大学湘雅三医院 (72)发明人 刘建业　刘彪　向伟　刘镓浩　 胡兴　 (74)专利代理 机构 长沙优企知识产权代理事务 所(普通合伙) 43243 代理人 刘佳芳 (51)Int.Cl. A61K 47/52(2017.01) A61K 47/69(2017.01) A61K 31/713(2006.01) A61P 35/00(2006.01)A61P 13/10(2006.01) C01B 33/22(2006.01) B82Y 40/00(2011.01) B82Y 5/00(2011.01) (54)发明名称 合成类纤维蛇纹石纳米材 料的新用途 (57)摘要 本发明公开了合成类纤维蛇纹石纳米材料 (SCNT)的新用途， 具体是作为 circPRMT5  siRNA 运载材料在癌症治疗 方面的应用， 进一步的具体 癌症为膀胱癌。 本发明运载载体为合成类纤维蛇 纹石纳米材料， 运载的是环状RNA的siRNA。 本发 明的实验结果表明运载 circPRMT5 siRNA的合成 类纤维蛇纹石纳米材料对 circPRMT5高表达的膀 胱癌细胞及组织具有很好的靶向作用， 同时能够 抑制肿瘤的生长及转移。 权利要求书1页 说明书6页 附图3页 CN 113952462 A 2022.01.21 CN 113952462 A 1.合成类纤维蛇纹石纳米材料的新用途， 其特征在于； 所述新用途为合成类纤维蛇纹 石纳米材 料作为circPRMT5  siRNA运载 材料在癌症治疗方面的应用。 2.根据权利要求1所述的合成类纤维蛇纹石纳米材料的新用途， 其特征在于； 合成类纤 维蛇纹石纳米材 料和circPRMT5  siRNA的质量比为1:15 ‑25。 3.根据权利要求1所述的合成类纤维蛇纹石纳米材料的新用途， 其特征在于； 合成类纤 维蛇纹石纳米载体的特征 峰分别为12.18 °、 19.55°、 24.33°、 36.62°和60.33°， 对应于纤维 蛇纹石标准中的特 征峰12.15 °、 19.38°、 24.35°、 36.526°、 60.33°。 4.根据权利要求1所述的合成类纤维蛇纹石纳米材料的新用途， 其特征在于； 合成类纤 维蛇纹石纳米材 料的长度为10 0‑200 nm， 外径20nm‑28 nm， 内径8nm ‑10 nm。 5.根据权利要求1所述的合成类纤维蛇纹石纳米材料的新用途， 其特征在于； 合成类纤 维蛇纹石纳米材料具有整体电负性， 等电点为  4.3， 在 41.0 mV 和 24.8 mV之间， zeta  电 位为负电位。 6.根据权利要求1所述的合成类纤维蛇纹石纳米材料的新用途， 其特征在于； 所述癌症 为膀胱癌。 7.权利要求1 ‑6任意一项所述的所述的合成类纤维蛇纹石纳米材料的新用途， 其特征 在于； 所述 合成类纤维蛇纹石纳米材 料的方法包括以下步骤： 以四乙氧基硅烷及六水氯化镁为原料， 将MgCl2·6H2O以Mg:Si= （1 ‑2） :1的比例溶于去 离子水中， 形成溶液， 然后加入Si(OCH3)4并搅拌15 ‑20分钟以制备0.1M的混合溶液； 通过滴 加1‑4 mol/L 碱溶液， 然后搅拌2 0‑30分钟， 将溶液的pH调节至12.0 ‑13.0； 将溶液倒入反应 器中进行水热合 成， 在230 ‑250℃恒温反应48 ‑72小时， 然后重复过滤并在55 ‑65℃下干燥6 ‑ 8小时获得。 8.权利要求1 ‑6任意一项所述的所述的合成类纤维蛇纹石纳米材料的新用途， 其特征 在于： 合成类纤维蛇纹石纳米材 料加载环状RNA  siRNA的方法包括以下步骤： 将合成类 纤维蛇纹石纳米材料高温灭菌， 在100 ‑120℃下保持20 ‑30分钟， 冷却至60 ‑70 ℃进行取样， 将si RNA离心5 ‑8分钟， 将焦碳酸二乙酯处理过并经消毒的纯水和siRNA注入酒 精中， 将焦碳酸二乙酯处理过并经消毒的纯水55 ‑65μL加入含0.5 ‑1.0 OD siRNA的siRNA   NC材料， 用移液枪反复冲洗2 ‑3次， 混合均匀， 所有样品置于同一离心材料中； 然后将10 ‑15 μ L siRNA与25 ‑30 μL蛇纹石溶液和空白焦碳酸二乙酯处理过并经高温高压消毒的纯水混合 均匀， 用密封膜密封， 然后用注射器针头刺入确保压力在0.8 ‑1.0 Kpa以下， 真空浸渍3 ‑4  h， 得到载有RNA的蛇纹石。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113952462 A 2合成类纤维蛇纹石纳米材料的新用途 技术领域 [0001]本发明属于生物医药技术领域， 具体涉及合成类纤维蛇纹石纳米材料的新用途， 具体是作为 circPRMT5  siRNA运载 材料在癌症治疗方面的应用。 背景技术 [0002]膀胱癌是最常见的泌尿系统恶性肿瘤之一， 其在世界范围内日益流行。 膀胱癌的 死亡率和发病率在中 国所有泌尿系统肿瘤中均居 首位。 尽管手术治疗和新联合化疗方案的 发展一定程度上提高了中位生存期,  然而约 50% 的膀胱癌患者在诊断后2年内发生复发/ 转移。 非肌肉浸润性膀胱癌高复发率和肌肉浸润性膀胱癌低生存率意味着对于膀胱癌新治 疗方法的迫切需要。 [0003]近年来， 在新开发的癌症治疗方法中， 基因治疗成为研究热点。 特别是， 下一代测 序导致了环状  RNA (circRNA)  的发现， 它现在在癌症基因组学和基因治疗的研 究中占据 中心地位。  CircRNA 是一类环状非编码  RNA 分子， 它们形成了没有游离帽和聚 （A） 尾的共 价闭合连续环， CircRNA  参与基因表达的调节， 并且在癌症 中， 它们已证明具有调节进展、 转移、 血材料生成、 细胞凋亡和增殖的潜力。 我们之前的研究表 明， circPRMT5  在膀胱癌组 织中高度表达， 并且与膀胱癌 患者的晚期临床分期和较差的生存率呈正相关。 [0004]RNA干扰(RNAi)是一种以序列特异性方式抑制  RNA/基因表达的有效方法， 在癌症 治疗中具有巨大潜力。 然而， 在生理环境中， 小干扰  RNA (siRNA) 会迅速降解； 因此， siRNA   的治疗性转运仍然是一个挑战。 目前， 只有  11 种包含 RNAi 治疗剂的临床制剂。 此外， 与 其他 siRNA 类似， si‑circPRMT5  显示出较低的体内转染效率。 据我们所知， 目前还没有关 于通过纳米颗粒递送si ‑circRNAs  进入癌细胞的报道。 在circRNA治疗中， 开发低毒性、 高 效的递送系统是一项重大挑战。 尽管非病毒载体是一种有效的选择， 但目前使用的药物受 到其高毒性和低转染效率的限制 。 在癌症治疗中， 已经报道了包含纳米载体的多种 药物载 体。 在临床试验中， 一些结合药物的纳米载体通过纳米颗粒在肿瘤中的被动聚集证明了有 效的癌症治疗， 这些效果 通过改善保留和渗透性实现， 并减少了全身副作用。 [0005]纤维蛇纹石  (Mg6Si4O10(OH)8) 是一种具有双层结构的三八面体硅酸 盐矿物结构， 由二氧化硅四面体  (SiO2) 和氢氧化镁八面体  (Mg(OH)2) 组成。 四面体和八面体层之间的 不一致， 意味着形成了三种不同的基本结构， 导致了三种矿物的形成。 呈卷曲圆柱状结构， 其矿物分布广泛， 结晶度高， 分离性好。 纤维蛇纹石是一种非常有用的工业矿物。 自然界产 生的纤维蛇纹石 大多形成中空的多层纳米材料结构， 其中含有大量不纯的矿物质和多种多 晶型物。 微量元素取代结构中的Mg和Si会形成大量的结构缺陷。 与天然纤维蛇纹石 （长度>   10 μm） 相比， 合成水硅酸盐纤维蛇纹石长 达数百纳米， 具有较低的毒性潜力。 [0006]对于合成水硅酸盐纤维蛇纹石， 制备方法不同， 其产品的性质和用途也会不同， 通 过调整合成纤维蛇纹石纳米材料的条件， 我们可以控制不同内外表 面性质、 不同粒径、 不同 成分、 卷曲模式和晶格 常数的纳米材料和材料状晶体的生长， 以及外源离子的取代模式。 因 此， 在本研究中， 我们旨在评估使用合成纤维蛇纹石纳米材料 （S CNT） 作为纳米载体递送si ‑说　明　书 1/6 页 3 CN 113952462 A 3