(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111335238.6 (22)申请日 2021.11.11 (71)申请人 浏阳朗林生物科技有限公司 地址 410300 湖南省长 沙市浏阳 经济技术 开发区竹山路10号 (72)发明人 曹慧璋　易宇阳　贺玉婷　 (74)专利代理 机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 4 4205 代理人 肖云 (51)Int.Cl. C07H 1/08(2006.01) C07H 19/16(2006.01) C07H 19/167(2006.01) C08B 37/00(2006.01) A61P 1/16(2006.01)A61P 3/06(2006.01) A61P 7/02(2006.01) A61P 9/00(2006.01) A61P 25/00(2006.01) A61P 25/28(2006.01) A61P 31/00(2006.01) A61P 31/12(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 37/02(2006.01) A61P 37/04(2006.01) A61P 39/00(2006.01) (54)发明名称 一种蛹虫草 提取物的制备方法及应用 (57)摘要 本发明公开了一种蛹虫草提取物的制备方 法及应用， 该制备方法， 包括以下步骤： S1、 将蛹 虫草原料微波水提， 将提取液浓缩后醇沉， 得醇 沉液； S2、 将步骤S1所得醇沉液浓缩后调节pH至 6.5～7.5后， 采用大孔树脂柱洗脱， 洗脱液依次 为水、 第一乙醇水溶液和第二乙醇水溶液； 收集 第二乙醇水溶液段洗脱液； S3、 将步骤S2所得第 二乙醇水溶液段洗脱液， 在氧化铝 柱中依次采用 第三乙醇水溶液、 第四乙醇水溶液和酸性乙醇水 溶液进行三段洗脱。 本发明不仅能同时制备高含 量的腺苷、 虫草素和N6 ‑(2羟乙基)腺苷， 综合利 用了蛹虫草中的有效成分， 且能实现工业化生 产、 工艺安全可靠、 对环境友好。 权利要求书1页 说明书12页 附图3页 CN 114163485 A 2022.03.11 CN 114163485 A 1.一种蛹虫草 提取物的制备 方法， 其特 征在于： 包括以下步骤： S1、 将蛹虫草原料微波水提， 将提取 液浓缩后醇沉， 得醇沉液； S2、 将步骤S1所得醇沉液浓缩后调节pH至6.5～7.5后， 采用大孔树脂柱洗脱， 洗脱液依 次为水、 第一乙醇水 溶液和第二乙醇水 溶液， 收集第二乙醇水 溶液段洗脱液； S3、 将步骤S2所得第二乙醇水溶液段洗脱液在氧化铝柱中依次采用第三乙醇水溶液、 第四乙醇水溶液和酸性乙醇水溶液进行三段洗脱， 第一段为腺苷洗脱液， 第二段为虫草素 洗脱液， 第三段为 N6‑(2‑羟乙基)腺苷洗脱液； 其中， 所述第三乙醇水 溶液的pH为6.5～6.8； 所述第四乙醇水 溶液的pH为6.5～6.8； 所述酸性乙醇水 溶液的pH为6.0～6.5 。 2.根据权利要求1所述的蛹虫草提取物的制备方法， 其特征在于： 步骤S1中所述微波水 提中水与所述蛹虫草原料的液固比为10～15： 1； 优选地， 步骤S1中所述微波水提中微波的 功率为300W～400W； 优选地， 步骤S1中所述微波水提的提取时间为30min～45min； 优选地， 步骤S1中所述醇沉的沉淀剂为体积分数为95％～ 99％的乙醇水 溶液。 3.根据权利要求1所述的蛹虫草提取物的制备方法， 其特征在于： 步骤S2中所述大孔树 脂包括HP D100树脂、 LX ‑207树脂和LP D400树脂中的一种。 4.根据权利要求1所述的蛹虫草提取物的制备方法， 其特征在于： 步骤S2中所述第一乙 醇水溶液的体积分数为10％～20％； 优选地， 所述第一乙醇水溶液的用量为1.5BV～2BV； 优 选地， 所述第二乙醇水溶液的体积分数为50％～70％； 优选地， 所述第二乙醇水溶液的用量 为2.5BV～3.5BV。 5.根据权利要求1所述的蛹虫草提取物的制备方法， 其特征在于： 步骤S3 中所述氧化铝 为中性氧化铝或碱性氧化铝。 6.根据权利要求1所述的蛹虫草提取物的制备方法， 其特征在于： 步骤S3 中所述第三乙 醇水溶液的体积分数为10％～20％； 优选地， 步骤S3中所述第三乙醇水溶液的用量为1BV～ 1.5BV； 优选地， 步骤S3中所述第四乙醇水溶液的体积分数为40％～50％； 优选地， 步骤S 3中 所述第四乙醇水溶液的用量为1.5BV～2BV； 优选地， 步骤S3中所述酸性乙醇水溶液的体积 分数为70％～80％； 优选地， 步骤S3中所述 酸性乙醇水 溶液的用量 为1BV～1.5BV。 7.根据权利要求1所述的蛹虫草提取物的制备方法， 其特征在于： 所述制备方法还包括 将所述腺苷洗脱 液、 所述虫草素洗脱 液和所述N6 ‑(2‑羟乙基)腺苷洗脱 液浓缩结晶； 所述浓 缩结晶的温度为0℃～10℃； 所述浓 缩结晶的时间为5 h～12h。 8.根据权利要求1所述的蛹虫草提取物的制备方法， 其特征在于： 当蛹虫草原料为蛹虫 草子实体时， 步骤S1中所述醇沉还需 收集醇沉渣， 将凝固剂添加至所述醇沉渣的溶液中， 制 得β‑葡聚糖提取物。 9.一种如权利要求1至8任一项所述的蛹虫草提取物的制备方法制备得到的蛹虫草提 取物在药物制备中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于： 所述药物包括抗肿瘤药物和/或抗菌药 物。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114163485 A 2一种蛹虫草提取物的制备方 法及应用 技术领域 [0001]本发明涉及中药提取技 术领域， 具体涉及一种蛹虫草 提取物的制备 方法及应用。 背景技术 [0002]蛹虫草(Cordyceps  militarys)又名北冬虫夏草， 属于真菌门(Fungi)子囊菌亚门 (Ascomycota)粪壳菌纲Sordariomycetes)肉座菌亚纲(Hypocreo ‑myce‑tidae)肉座菌目 (Hypocreales)虫草科(Cordy ‑cipitaceae)虫草属(Cordyc eps)， 是一种具有多种药理功能 的食(药)用菌。 蛹虫草中含有核苷类化合物、 虫草酸、 虫草多糖、 麦角甾醇和氨基酸等多种 生理活性物质， 具有很高的药用和保健价值， 其中蛹虫草粗蛋白含量在30％左右， 氨基酸总 量达到22％， 蛹虫草多糖高达9.86％， 虫草酸含量为5％～10％左右。 核苷类物质为虫草的 主要活性成分之一， 具有广泛的生理功能， 至今已从蛹虫草及发酵菌丝中分离鉴定到11种 核苷类化合物， 主要包括虫草素、 腺苷和N6 ‑(2‑羟乙基)腺苷等。 β ‑葡聚糖作为多糖研 究领 域中的一个重要分支， 广泛分布于真菌、 细菌和植物体内， 是构筑多种生物细胞壁的材料， 而多糖的β 型结构， 也被认为是其发挥生物活性的主要原因。 真菌β ‑葡聚糖主要有两类， β ‑ 1， 3葡聚糖和β ‑1， 6葡聚糖， 既有水溶性葡聚糖， 又有 水不溶性葡聚糖， 但水溶性葡聚糖的应 用范围更广。 [0003]相关技术中， 大部分制备方法侧重于单一提取虫草素或同时提取虫草素和虫草多 糖， 但同时提取腺苷和虫草素的方法较少， 而同时提取腺苷、 虫草素和N6 ‑(2‑羟乙基)腺苷 的制备方法更少。 且相关技术中同时提取腺苷、 虫草素和N6 ‑(2‑羟乙基)腺苷的方法中会选 甲醇为溶剂(甲醇毒性较高)， 同时还采用反向高效液相色谱分离才能实现三者的同时提取 (成本较高且提取量小)。 因此， 相关技术中的提取方法存在提取量低且无法大规模生产的 技术问题。 [0004]综上， 需要开发一种蛹虫草提取物的制 备方法， 利用该方法可以同时高效制 得腺 苷、 虫草素和N6 ‑(2‑羟乙基)腺苷。 发明内容 [0005]为解决现有技术中存在的问题， 本发明提供了一种蛹虫草提取物的制 备方法， 利 用该方法可以同时高效制得腺苷、 虫草素和N6 ‑(2‑羟乙基)腺苷。 [0006]本发明还提供了上述蛹虫草 提取物的应用。 [0007]本发明第一方面 提供了一种蛹虫草 提取物的制备 方法， 包括以下步骤： [0008]S1、 将蛹虫草原料微波水提， 将提取 液浓缩后醇沉， 得醇沉液； [0009]S2、 将步骤S1所得醇沉液浓缩后调节p H至6.5～7.5后， 采用大孔树脂柱洗脱， 洗脱 液依次为水、 第一乙醇水 溶液和第二乙醇水 溶液； 收集第二乙醇水 溶液段洗脱液； [0010]S3、 将步骤S2所得第二乙醇水溶液段洗脱液,在氧化铝柱中依次采用第三乙醇水 溶液、 第四乙醇水溶液和酸性乙醇水溶液进 行三段洗脱， 第一段为腺苷洗脱液， 第二段为虫 草素洗脱液， 第三段为 N6‑(2‑羟乙基)腺苷洗脱液；说　明　书 1/12 页 3 CN 114163485 A 3