(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111418191.X (22)申请日 2021.11.26 (71)申请人 滨州医学院 地址 264000 山东省烟台市莱山区观海路 346号 (72)发明人 闫苗苗　魏光成　霍业鸿　 (51)Int.Cl. C07K 7/08(2006.01) C07K 1/08(2006.01) C07K 1/06(2006.01) C07K 1/04(2006.01) A61K 38/10(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种抗癌脂肽的制备及其在抗肿瘤治疗中 的应用 (57)摘要 本发明涉及一种抗癌脂肽C8H15O‑Asp‑Ser‑ Asp‑Val‑Trp‑Trp‑Gly‑Gly‑Arg‑Arg‑Leu‑Leu‑ Arg‑Arg‑Leu‑Arg‑Arg‑Leu的制备及其在抗肿瘤 治疗中的应用， 属于生物医药领域。 所述抗癌脂 肽基于膜裂解肽的关键生物学特征(正电荷、 α ‑ 螺旋结构和两亲性)制备。 本发明提供了所述抗 癌脂肽的固相合成方法。 本抗癌脂肽具有疏水力 矩小、 溶血活性低以及血清稳定性好的特点， 能 有效弥补大多数抗癌肽高溶血毒性的缺陷， 解决 肽类药物体内稳定性差的问题。 体外抗癌实验及 体内抗肿瘤实验证明本抗癌脂肽具有良好的抗 肿瘤效果， 有很好的应用前 景。 权利要求书2页 说明书7页 序列表1页 附图4页 CN 114014911 A 2022.02.08 CN 114014911 A 1.一种抗癌脂肽， 其特征在于， 从N端到C端的序列为C8H15O‑Asp‑Ser‑Asp‑Val‑Trp‑ Trp‑Gly‑Gly‑Arg‑Arg‑Leu‑Leu‑Arg‑Arg‑Leu‑Arg‑Arg‑Leu， 其中Asp为天冬氨酸， Ser为丝 氨酸， Val为缬氨酸， Trp为色氨酸， Gly为甘氨酸， Arg为精氨酸， Leu为亮氨酸， C8H15O表示正 辛酸(C8H16O2)在与N末端Asp的氨基脱水缩合后的分子式， 抗癌脂肽具体结构式如下： 2.抗癌脂肽C8H15O‑Asp‑Ser‑Asp‑Val‑Trp‑Trp‑Gly‑Gly‑Arg‑Arg‑Leu‑Leu‑Arg‑Arg‑ Leu‑Arg‑Arg‑Leu的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)首先通过固相合成法合成Fmoc ‑Asp(OtBu) ‑Ser(tBu) ‑Asp(OtBu) ‑Val‑Trp‑(Boc)‑ Trp(Boc) ‑Gly‑Gly‑Arg(Pbf) ‑Arg(Pbf) ‑Leu‑Leu‑Arg(Pbf) ‑Arg(Pbf) ‑Leu‑Arg(Pbf) ‑Arg (Pbf)‑Leu‑Wang Resin； 称取一定量的Fmoc ‑Leu‑Wang Resin(Fmoc全称为9 ‑芴基甲氧基羰基在此作为氨基保 护基)加入DMF(N,N ‑二甲基甲酰胺)溶胀树脂30min， 然后按照DMF： 哌啶＝4:1的比例加入哌 啶， 反应30min脱除Fmoc基团， 反应完成后进行抽滤， 并依次用DMF、 DCM(二氯甲烷)、 DMF多次 洗涤树脂， 重新加入无水DM F溶胀30min， 加入两倍摩尔量的Fmoc ‑Arg(Pbf) ‑OH(Pbf为Arg的 侧链保护 基)、 2.6倍摩尔量的DCC(二环己基碳二亚胺)、 HOBT(1 ‑羟基苯并三唑)和DIEA(N, N‑二异丙基乙胺)， 在室温下反应48h， 反应完成后依次用DMF、 DCM、 DMF多次洗涤树脂， 然后 转移到透析袋内(MW： 8000 ‑14000)， 用无水乙醇透析纯化， 将透析完的样品冷冻干燥得 Fmoc‑Arg(Pbf) ‑Leu‑Wang Resin， 重复上述步骤依次偶联氨基酸直至合成Fmoc ‑Asp (OtBu)‑Ser(tBu) ‑Asp(OtBu) ‑Val‑Trp(Boc) ‑Trp(Boc) ‑Gly‑Gly‑Arg(Pbf) ‑Arg(Pbf) ‑ Leu‑Leu‑Arg(Pbf) ‑Arg(Pbf) ‑Leu‑Arg(Pbf) ‑Arg(Pbf) ‑Leu‑Wang Resin， 其中Boc为Trp侧 链保护基， tBu为Ser侧链保护基， OtBu为Asp侧链保护基； (2)C8H15O‑Asp‑Ser‑Asp‑Val‑Trp‑Trp‑Gly‑Gly‑Arg‑Arg‑Leu‑Leu‑Arg‑Arg‑Leu‑Arg‑ Arg‑Leu的合成； 首先将Fmoc ‑Asp(OtBu) ‑Ser(tBu) ‑Asp(OtBu) ‑Val‑Trp(Boc) ‑Trp(Boc) ‑Gly‑Gly‑Arg (Pbf)‑Arg(Pbf) ‑Leu‑Leu‑Arg(Pbf) ‑Arg(Pbf) ‑Leu‑Arg(Pbf) ‑Arg(Pbf) ‑Leu‑Wang Resin 按照(1)中步骤脱除Fmoc基团得到Asp(OtBu) ‑Ser(tBu) ‑Asp(OtBu) ‑Val‑Trp(Boc) ‑Trp (Boc)‑Gly‑Gly‑Arg(Pbf) ‑Arg(Pbf) ‑Leu‑Leu‑Arg(Pbf) ‑Arg(Pbf) ‑Leu‑Arg(Pbf) ‑Arg (Pbf)‑Leu‑Wang Resin； 将2倍摩尔量的C8H16O2(正辛酸)、 2.5倍摩尔量的NHS(N ‑羟基琥珀 酰亚胺)和2.5倍摩尔量的EDC(1 ‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺)加入无水DMF中磁 力搅拌5h以活化C8H16O2的羧基， 然后加入Asp(OtBu) ‑Ser(tBu) ‑Asp(OtBu) ‑Val‑Trp(Boc) ‑ Trp(Boc) ‑Gly‑Gly‑Arg(Pbf) ‑Arg(Pbf) ‑Leu‑Leu‑Arg(Pbf) ‑Arg(Pbf) ‑Leu‑Arg(Pbf) ‑Arg (Pbf)‑Leu‑Wang Resin反应48h,抽滤并转移到透析袋内(MW： 8000 ‑14000)， 用无水乙醇透 析纯化， 冷冻干燥得C8H15O‑Asp(OtBu) ‑Ser(tBu) ‑Asp(OtBu) ‑Val‑Trp(Boc) ‑Trp(Boc) ‑ Gly‑Gly‑Arg(Pbf) ‑Arg(Pbf) ‑Leu‑Leu‑Arg(Pbf) ‑Arg(Pbf) ‑Leu‑Arg(Pbf) ‑Arg(Pbf) ‑权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114014911 A 2Leu‑Wang Resin， 按照三氟乙酸(TFA)： 水(H2O)： 三异丙基硅烷(Tis)＝95:2.5:2.5的比例 配制成切割液与冻干后的树脂混合， 磁力搅拌1.5h以脱除树脂和所有侧链保护基， 反应完 成后抽滤取滤液， 旋蒸浓缩， 加入冰乙醚产生沉淀， 离心并加入乙醚多次洗涤沉淀， 冷冻干 燥得到脂肽C8H15O‑Asp‑Ser‑Asp‑Val‑Trp‑Trp‑Gly‑Gly‑Arg‑Arg‑Leu‑Leu‑Arg‑Arg‑Leu‑ Arg‑Arg‑Leu。 3.权利要求1所述抗癌脂肽C8H15O‑Asp‑Ser‑Asp‑Val‑Trp‑Trp‑Gly‑Gly‑Arg‑Arg‑Leu‑ Leu‑Arg‑Arg‑Leu‑Arg‑Arg‑Leu在制备抗肿瘤药物中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114014911 A 3